MALBAC 單細胞起始的DNA測序文庫構(gòu)建試劑盒

來源：紅榮微再（上海）生物工程技術(shù)有限公司 2020年11月10日 11:34

單細胞起始的DNA測序文庫構(gòu)建

PicoPLEX^® Gold Single Cell DNA-Seq Kit

· 高重現(xiàn)性和準確性：可用于CNV、SNV和非整倍體檢測
· 在SNV和CNV檢測方面優(yōu)于MDA技術(shù)
· 三小時的工作流程，手動操作時間不到30分鐘
· 均勻的高覆蓋率，低的等位基因插入率和脫扣率

■ 應(yīng)用：

適用于以下細胞類型的文庫制備：

· 癌癥研究：循環(huán)腫瘤細胞（CTC）,激光捕獲顯微切割（LCM）細胞或DNA，
以及細針抽吸（FNA）細胞；
· 生殖健康研究：胚胎細胞和循環(huán)胎兒細胞；
· 發(fā)育生物學(xué)：胚胎細胞，干細胞和稀有細胞；
· 宏基因組學(xué)和微生物學(xué)：微生物細胞，微生物組和環(huán)境樣品。

■ 產(chǎn)品說明：

PicoPLEX Gold Single Cell DNA-Seq Kit

PicoPLEX Gold Single Cell DNA-Seq Kit (PicoPLEX Gold) 是一種旨在從單細胞中生成高質(zhì)量的DNA文庫，以便在Illumina平臺進行測序的試劑盒。該試劑盒基于PicoPLEX技術(shù)，優(yōu)化用于檢測拷貝數(shù)變異 (CNVs)、單核苷酸變異 (SNVs)、插入缺失 (indels) 和結(jié)構(gòu)變異 (SV)。PicoPLEX Gold kit在SNV檢測中表現(xiàn)出比MDA技術(shù)更好的性能。
PicoPLEX Gold Single Cell DNA-Seq Kit不包含index。兼容的 Index如下所述，需要單獨購買。
PicoPLEX WGA是一種被廣泛用于檢測單細胞中CNV的全基因組擴增（WGA）技術(shù)。初，PicoPLEX技術(shù)主要用于高再現(xiàn)性的檢測非整倍體異倍性和CNV。為了滿足準確檢測SNV的需求，對PicoPLEX WGA技術(shù)中的酶、引物和protocols進行了進一步優(yōu)化，不僅提升了擴增的覆蓋度、一致性、準確性，同時提高了CNV、SNV、Indel和其他SV的分辨率，并且保持了高重現(xiàn)性。
PicoPLEX Gold Single Cell DNA-Seq Kit可以固定細胞或非固定細胞起始，只需簡單的4步操作流程，即可在3小時內(nèi)完成Illumina NGS文庫的構(gòu)建，且手動操作時間非常短。

DNA HT dual index kits

DNA HT dual index kits是與 ThruPLEX或 PicoPLEX文庫制備試劑盒搭配使用，用以構(gòu)建Illumina測序文庫的index引物試劑盒。這些試劑盒包含Illumina Nextera^® XT v2 index序列對應(yīng)的index引物，多可提供384種不同的雙端index，用于樣本混合測序時的區(qū)分。其中index引物預(yù)先分裝在4個的不同條形碼標記的index微孔板中，每個微孔板可提供不同的96種index組合 (Code No.R400660-R400663)，index微孔板（96N Sets A-D）的每個孔提供的量足夠進行一次測序反應(yīng)；另一種是一套中有24個單獨的反應(yīng)管，每個反應(yīng)管中包含不同的雙端index組合（Code No.R400664），且每個反應(yīng)管（24N）提供的量足夠進行兩次測序反應(yīng)。

DNA unique dual index kits

DNA unique dual index kits是與 ThruPLEX或 PicoPLEX文庫制備試劑盒搭配使用，用以構(gòu)建Illumina測序文庫的index引物試劑盒。這些試劑盒包含“IDT for Illumina UD”對應(yīng)的index引物，多可提供96種不同雙端index，用于樣本混合測序時的區(qū)分。index引物預(yù)先分裝在不同的4組各24個單獨的管中，其中每組可提供24種不同index引物組合（Code No.R400665-R400668）。每個index引物管（24U Sets A-D）提供的量足夠進行兩次測序反應(yīng)。

DNA single index kits

DNA single index kits是與 ThruPLEX或 PicoPLEX文庫制備試劑盒搭配使用，用以構(gòu)建Illumina測序文庫的index引物試劑盒。這些試劑盒包含與“TruSeq LT set A”序列對應(yīng)的index引物，可提供24種單端index，用于樣本混合測序時的區(qū)分。index引物預(yù)先分裝在不同的2組各12個單獨的管中，其中每組可提供12種不同index引物組合（Code No.R400695和R400697）。每個index引物管（12U Sets A-B）提供的量足夠進行8次測序反應(yīng)。

圖1. PicoPLEX Gold Single Cell DNA-Seq Kit技術(shù)。
PicoPLEX Gold的技術(shù)概要。通過step1裂解細胞獲得gDNA，通過隨機引物進行預(yù)擴增 (step 2)，然后進行指數(shù)擴增得到測序文庫（step 4）。

圖2. PicoPLEX Gold的主要特點：高覆蓋度，高均勻性，和高重現(xiàn)性 (與A產(chǎn)品技術(shù)相比)。
Panel A. 圖中顯示在不同深度的測序中覆蓋的堿基數(shù) (～35M read pairs，PE 2 × 150 bp) 。PicoPLEX Gold在較低深度的覆蓋度與A產(chǎn)品 (MDA) 相似，在較高深度的覆蓋度高于A產(chǎn)品（MDA）。
Panel B. 以gDNA樣本 (NA12878) 和單細胞樣本 (GM12878) 起始，使用PicoPLEX Gold和A產(chǎn)品進行全基因組擴增。相比較于MDA，PicoPLEX Gold顯示出更均勻的覆蓋度。
Panel C. 評估覆蓋度的重現(xiàn)性。與A產(chǎn)品 (右) 相比，PicoPLEX Gold (左) 的在兩個單細胞群之間的一致性明顯更好。

圖3. 使用PicoPLEX Gold進行高質(zhì)量單核苷酸變異（SNV）檢測。
Panel A. 以單細胞（1c），5個細胞（5c）或15 pg的 NA12878 gDNA起始，比較A產(chǎn)品（MDA），PicoPLEX Gold（PP Gold）和 PicoPLEX WGA（PP WGA）這3個試劑盒之間的SNV檢測率。其中1個和5個細胞的測序深度為35M read pairs， gDNA樣品深度為40M read pairs。PicoPLEX Gold（藍色）有高的保真度和覆蓋度，與A產(chǎn)品（灰色）和PicoPLEX WGA（紫色）相比，可以高質(zhì)量的檢測更多的SNV（2-9倍），具有明顯的優(yōu)勢。
Panel B. PicoPLEX Gold（藍色）的B等位基因頻率的對稱分布，以0.5為中心，展示兩個等位基因的平衡情況。與A產(chǎn)品（MDA）相比，PicoPLEX具有更好的等位基因平衡（灰色）。
Panel C. PicoPLEX Gold的無偏擴增, 在測試的所有單細胞文庫制備的技術(shù)中，表現(xiàn)出等位基因脫扣率（假陰性）。
Panel D. PicoPLEX Gold試劑盒中的聚合酶具有高保真度（藍色），使得等位基因插入率與A產(chǎn)品（灰色）相當，且顯著低于PicoPLEX WGA（紫色）。

產(chǎn)品訂購信息：

產(chǎn)品編號	產(chǎn)品名稱	單位
R300669	SMARTer® PicoPLEX® Gold Single Cell DNA-seq Kit	24
R300670	SMARTer® PicoPLEX® Gold Single Cell DNA-seq Kit	96
R300698	SMARTer® PicoPLEX® Gold Single Cell DNA-Seq Kit	384

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