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液相色譜柱科普知識大全，你真不一定都懂
液相色譜柱的選擇應根據目標分析物的分子量大小、溶解性、Pka值，以及分離要求、儀器、成本等各方面來考慮，比如說可以根據分離目的選色譜柱，對映體分離常選擇手性柱，離子化色譜可選擇離子柱，蛋白多肽、DNA可選擇凝膠柱或離子交換柱，一般的小分子化合物可選擇普通反相柱，如C18、C8柱、苯基柱等等。
根據實際需求和設備選擇填料粒徑，普通HPLC一般選擇5μm或3.5μm粒徑的色譜柱，而UPLC則常使用1.7μm——3.5μm的色譜柱。比表面積，高比表面積有助于分離，低比表面積更適合梯度洗脫程序。
液相色譜柱的相關知識點擴展：
1）平均顆粒度，顆粒度分布顆粒度(dp)越小：柱效越高(傳質好，渦流擴散小)柱壓越高(滲透性差)顆粒分布
顆粒分布越寬∶柱效低(滲透性差)
顆粒形狀球型∶柱效高、重現性好、柱床結構均勻
無定型：柱床結構不均勻流動相線性速度不均勻，譜帶擴展
2）鍵合相化學
1.影響化合物的分離度
2.不同鍵合相對不同種類的化合物分離不同
3.可能導致色譜的分離機理不同如：C18、C8、CN
3）含碳量
1.含碳量越高，k‘值越大（固定相傳質效應增加）
2.高含碳量 有利于不易保留的化合物的分離、水解穩定性好，重現性好、有利于極性化合物的拖尾改善
3.低含碳量 有利于分析中性及堿性化合物、降低溶劑損耗、填料的端基封口、封口殘余硅羥基、減少不可逆吸附或拖尾、增加碳含量（0.1%-1%）
4）填料的端基封口
封口殘余硅羥基、減少不可逆吸附或拖尾、增加碳含量（0.1%-1%）
5）硅膠的活性
主要影響堿性化合物的保留行為：k'，生產硅膠時處理溫度不同，硅膠活性也不同，是選擇性差異的主要來源，硅膠的雜質含量，重金屬含量低，硅羥基活性小，拖尾減小，是色譜柱質量好壞的重要標志，填料的穩定性，硅膠填料，pH：2-8，聚合物填料，pH：2-12，pH值小于2時，鍵合相水解，液相色譜法能否將某一樣品*分離，主要取決于液相色譜柱的選擇性和柱效，這在很大程度上取決于固定相的選擇是否適當。
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