Elisa檢測試劑盒采用間接法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被豬藍耳病抗體(PRRS-Ab)捕獲抗原的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成黃色。
在應用Elisa檢測試劑盒時,首先要清楚下面內容:我們測定Elisa試劑盒到底是檢測抗體還是抗原?對這兩種抗體,抗原分別作了測試,大家可以根據我們給出的結果做個對別,從而分辨出Elisa試劑盒到底是檢測抗體還是抗原?
1、檢測抗原:
常用于檢測抗原的方法是非競爭性的雙抗體夾心法,其次是競爭法。但競爭法在具體實驗中有些困難,特別是檢測微生物的抗原,因為需要標記抗原,這對于某些抗原是很難做到的,甚至是不可能的。另外在競爭法中,酶標記的抗原與標本直接混合在一起,許多標本中含有酶抑制劑或蛋白A樣物質,可影響ELISA的結果。
2、檢測抗體:
檢測抗體種類常用的方法是檢測抗體種類的捕獲法,這個方法常用于檢測特異性IgG、IgA和IgM。這個方法是捕獲所需要檢測的一個種類的抗體,接下來是檢測捕獲的抗體是否是特異性抗原的抗體。間接ELISA在檢測IgG時比較簡單,但不適用于檢測其他種類的抗體,因為血清中如果有特異IgG存在將與IgM或IgA等競爭結合抗原。
Elisa檢測試劑盒操作注意事項:
1、試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶,這屬于正常現象,水浴加熱使結晶*溶解后再使用。
2、實驗中不用的板條應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。
3、預處理后的樣本無需稀釋,直接取10μL加樣即可。
4、所有液體組分使用前充分搖勻。
5、Elisa檢測試劑盒需要嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
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