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紙層析法又稱紙色譜法。以紙為載體的色譜法。固定相一般為紙纖維上吸附的水分，流動相為不與水相溶的有機溶劑；也可使紙吸留其他物質作為固定相，如緩沖液，甲酰胺等。將試樣點在紙條的一端，然后在密閉的槽中用適宜溶劑進行展開。當組分移動一定距離后，各組分移動距離不同，后形成互相分離的斑點。將紙取出，待溶劑揮發后，用顯色劑或其他適宜方法確定斑點位置。根據組分移動距離（Rf值）與已知樣比較，進行定性。用斑點掃描儀或將組分點取下，以溶劑溶出組分，用適宜方法定量（如光度法、比色法等）。
紙層析是層析法的一種,要了解紙層法還得從層析法開始.層析法又稱色層分析法或色譜法（Chromatography），是一種基于被分離物質的物理、化學及生物學特性的不同，使它們在某種基質中移動速度不同而進行分離和分析的方法。例如：我們利用物質在溶解度、吸附能力、立體化學特性及分子的大小、帶電情況及離子交換、親和力的大小及特異的生物學反應等方面的差異，使其在流動相與固定相之間的分配系數（或稱分配常數）不同，達到彼此分離的目的。
層析根據固定相基質的形式分類，層析可以分為紙層析、薄層層析和柱層析。其中紙層析是指以濾紙作為基質的層析。
紙層析法原理分配層析在紙層析中的流動相是指層析液，在毛細拉力作用下，層析液能不斷由下向上流動。固定相是指被吸附在濾紙纖維之間的水分。由于纖維素上的羥基具親水性使這部分水束縛在纖維素周圍，不易擴散而成為固定相。在層析過程中，當層析液在毛細拉力作用下，上升流經色素濾液細線時，濾液細線上的色素就相繼融入層析液，隨著層析液上升，并發生在分配，即有一部分色素從層析液分配溶解到固定相中，直到平衡。由于分配系數的不同，那些分配系數大的色素分子，隨層析液向上移動得快，形成的色素帶集中在濾紙的上部；而分配系數小的色素分子，隨層析向上移動得慢，形成的色素帶集中在濾紙的下面。
層析法的大特點是分離效率高，它能分離各種性質極相類似的物質。而且它既可以用于少量物質的分析鑒定，又可用于大量物質的分離純化制備。因此，作為一種重要的分析分離手段與方法，它廣泛地應用于科學研究與工業生產上。現在，它在石油、化工、醫藥衛生、生物科學、環境科學、農業科學等領域都發揮著十分重要的作用。
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