中華絨螯蟹呼腸孤病毒RNA核酸檢測試劑盒操作步驟:
1:樣品準備:取1毫升細胞培養上清(貼壁和懸浮細胞都可以,*已培養48小時以上),在16000g離心5分鐘,小心棄去上清,避免丟失沉淀(沉淀量有可能很少,目視看不到)。將沉淀用無菌PBS重懸,在16000g離心5分鐘,同樣小心棄去上清,如此反復用無菌PBS洗三次。*將獲得的沉淀用100微升超純水重懸,置于100℃水浴中孵育5分鐘。如此制備好的樣品可在4℃保存1到2個月。
2:PCR反應的準備:
待各組份融化后先瞬時離心,然后輕彈混勻。按下表在已滅菌的PCR管中配制反應體系,每次實驗需加一個陰性和一個陽性對照,測試反應管可以有多個。配制過程中應注意無菌,戴口罩,并注意避免操作產生的氣溶膠造成樣品間的交叉污染,推薦在有風壓的設備如超凈臺或生物安全柜中進行操作。建議配制完畢后瞬時離心以使液體沉至管底。
檢測特異性與靈敏度:
高性能的UNICONTM Taq熱啟動酶及組分優化的反應體系保證高度的特異性擴增,提升了擴增效率,使得UNICONTM qPCR Master Mix具有*的檢測靈敏度。以人293T細胞cDNA為模板,在相同條件下擴增低拷貝hbcl6基因,與同類產品相比,UNICONTM qPCR Master Mix具有更好的擴增特異性、更高的擴增效率及更好的復孔重復性,檢測靈敏度更高。
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