二抗是在其他宿主體內制備的能與一抗或一抗片段結合的抗體，上面通常連有酶或熒光素等標記物。二抗針對某一特定物種的所有抗體均具有特異性，因而使用標記的二抗可以免去對每一個一抗進行標記，大大節省了時間和費用。

檢測任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇，同時在后繼實驗中也會有不同的檢測方案，如ELISA、WB、IHC、IF、IP、Flo等，因此在選擇二抗的時候要綜合考慮一抗的類型及后繼檢測方案的要求，一般來說，選擇合適的二抗需要從下面幾個方面考慮：

21. 一抗的種屬來源：

二抗應根據一抗的物種來源選擇相應的抗該物種的二抗，例如：如果一抗是小鼠源的單克隆抗體，二抗則選抗小鼠的二抗。

21. 一抗的類別與亞型：

二抗需與一抗的類別或亞類相匹配，通常是針對單克隆抗體而言。如果單克隆一抗是小鼠IgG的某一亞類，那么幾乎所有的抗小鼠IgG都可以與之結合，在不清楚一抗為何種類/亞類的情況下，可以選用抗相應物種IgG,或者你也可以選擇專門針對這一亞類的二抗。

21. 二抗的種屬來源：

二抗的種屬來源與其質量沒有必然的聯系，不同來源的二抗在一般的實驗里沒有太多的差別。然而在一些特殊的實驗里，如雙標實驗里，如果兩個一抗一個山羊來源，一個小鼠來源，則相應的二抗分別要抗山羊和抗小鼠的二抗，這時候，二抗就不能選擇山羊或者小鼠來源的。

21. 二抗的耦聯標記：

耦聯到二抗上的標記主要有酶（辣根過氧化酶HRP和堿性磷酸酶AP或其衍生物APAAP，PAP），熒光基團（FITC、PE、Dylight等），生物素，金顆粒。選用哪種探針的二抗主要取決于具體的實驗。對于WesternBlot和ELISA，常用的二抗是酶標二抗；而細胞或組織標記實驗（細胞免疫化學、組織免疫化學、流式細胞術）中常用熒光基團標記的二抗；免疫組化中也可以使用HRP或AP標記的二抗。

21. 二抗的純度：

親和層析純化相對于傳統血清的純化、鹽沉淀等方法更加高效，得到的抗體純度較高，產生的非特異性背景少，所以親和層析純化的抗體一般更受人們歡迎。

21. 血清吸附處理：

經過血清吸附過的二抗排除了與相關物種組織可能發生非特異性反應的免疫球蛋白，因此將二抗與樣本的非特異性結合降低到更低。如經過人血清吸附過的二抗，在檢測過程中就不會與樣本中人的免疫球蛋白發生交叉反應。

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