三級淋巴結構TLS示意圖，圖片來源于自網絡 

本文研究了在G1/G2期非功能性胰腺神經內分泌腫瘤中三級淋巴結構TLS的分布、細胞組成、與腫瘤浸潤免疫細胞的相關性以及預后價值。其主要方法就是對取自兩個隊列的患者腫瘤組織樣本進行HE染色、IHC及mIHC染色分析。 
研究發現超過1/ 3的G1/G2期非功能性胰腺神經內分泌腫瘤樣本中發現了TLS，且位于瘤周、腫瘤組織外沿或間質區。TLS主要由帶有生發中心的B細胞濾泡和帶有樹突狀細胞的T細胞區組成。Kaplan-Meier分析顯示，TLS的存在與更長的無復發生存期(RFS, p＜0.001)和總生存期(OS, p=0.001)相關，而TLS的數量則沒有預后意義。 

三級淋巴結構TLS的IHC及組織學情況 
 

如上圖所示，研究者首先用常規IHC方法鑒定了TLS中CD4+T細胞、CD8+T細胞、CD20+B細胞、CD11c+DCs、CD45RO+記憶性T細胞、NCR1+的NK細胞、FOXP3+Tregs和CD68+的腫瘤相關巨噬細胞TAMs；進而根據IHC的結果，選擇對TLS中作為主要組成的CD45RO+記憶性T細胞、CD4+T細胞、CD8+T細胞和CD20+B細胞進行mIHC多色共定位，結果如下圖所示，深入定量分析可知TLS中占比較多的是39.35%的CD45RO+記憶性T細胞，然后是36.61%的CD20+B細胞、20.05%的CD4+T細胞以及3.99%的CD8+T細胞。

非功能性胰腺神經內分泌腫瘤樣本的mIHC多色結果
 

后續的研究，研究者探討了TLS存在與否和兩組隊列樣本無復發生存期RFS及總生存期OS的關系，結果如下圖所示，TLS顯著提升了兩組隊列RFS和OS值。

Association of the presence of TLS with RFS and OS in the Fudan cohort (A,B) and external validation set (C,D).
 

本文研究人員認為三級淋巴結構TLS在G1/G2期非功能性胰腺神經內分泌腫瘤組織中表征了一個免疫應答微環境，并且有潛力成為分析RFS和OS的一個獨立預后因素。 
愛必信生物提供專業的mIHC多重熒光免疫組化服務，包含預實驗驗證-染色-拍照-分析全過程，如上述文獻所涉及的多色實驗內容我司服務均可覆蓋！ 

【愛必信mIHC服務】

* 我們可以提供的服務：
Absin多重熒光免疫組化服務提供預實驗驗證-染色-拍照-分析全過程。 
六指標七色（含DAPI）的多色免疫組化服務（芯片四指標五色），樣本涵蓋石蠟切片、冰凍切片及組織芯片（TMA），組織大片請提供單塊組織切片，FFPE樣本，厚度3-5um。正式實驗大概每例2張，1張備用。預實驗樣本數量根據預實驗方案定。

(* 所有抗體指標需要您提供)

* 我們可以提供的服務結果：

1.五色及以下提供全片200X（相當于物鏡20X，目鏡10X）原圖，六七色提供視野200X圖片，選定視野一般默認3視野，超過視野單獨收費，收費標準根據具體情況訂，提供看圖軟件可在客戶端打開。數據上傳網盤1G以內，或用U盤寄送1G以上。
2.客戶約定區域的單細胞分析結果：

• 單陽性細胞占有核細胞百分比，密度。
• 雙陽性細胞占有核細胞百分比，密度。
• 組織面積和特定病理形態面積計算。
• TMA提供每個芯點的以上定量結果。

Absin多色試劑盒（abs50032） 

組分信息： SuperNova系列染料（可選）、信號放大反應液、鼠兔通用型或者抗兔抗鼠HRP標記二抗、抗熒光淬滅封片劑、DAPI 
產品特點： 可快速完成高達六指標七色的熒光多標記； 染料經過優化處理，相比普通染料，強度更高，持續時間更長； 有組化經驗即可操作，染色無需特殊儀器，提供詳細的protocol