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紫外可見分光光度計的工作原理：基于朗伯-比耳(Lambert-Beer)定律，即物質在一定濃度下的吸光度與它的吸收介質的厚度呈正比。
通常表述為：
當一束平行的單色光通過某一均勻的有色溶液時，溶液的吸光度與溶液的濃度和光程的乘積成正比，其數學表達式如下：
A=-lg（ It/I0 ）= - lgT= =εbC
式中，A 為吸光度；
I0為入射的單色光強度；
It為透射的單色光強度；
T為物質的透射率；
ε為摩爾吸光系數（L·mol-1·cm-1）；
b為被吸收層厚度（cm），即比色皿的光程；
C為物質的摩爾濃度（mol·L-1）。
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