小鼠ELISA試劑盒用此法判別效果要求試驗條件十分安穩，試劑的制備有必要標準化，陽性和陰性的對照品應契合必定的規格，須配用精密的儀器，并嚴格按規則操作。陽性判定值公式中的常數是在這特定的體系中通過對許多標本的試驗檢測而得到的。現舉某種檢測 HBsAg 的試劑盒為例。試劑盒中的陰性對照品為不含HBsAg 的復鈣人血漿，陽性對照品HBsAg 的含量標明為P=9±2ng /ml。每次試驗設2 個陽性對照和3 個陰性對照。

測得A 值后，先核算陰性對照A 值的平均數（NC X ）和陽性對照A 值的平均數（PCX），兩個平均數的差（P-N）有必要大于一個特定的數值（例0.400），試驗才有用。3 個陰性對照A 值均應≥0.5×NCX，并≤1.5 ×NCX，如其中之一超出此規模，ELISA試劑盒則棄去，罷了另兩個陰性對照從頭核算NCX；如有兩個陰性對照A 值超出以上規模，則該次試驗無效。

標本 A 值＞陽性判定值的為陽性，小于陽性判定值的為陰性。小鼠ELISA試劑盒應留心的是，式中0.05 為該試劑盒的常數，只適合于該特定條件下，而不是對各種試劑均可通用。依據以上敘說能夠看出，在這種方法中陰性對照和陽性對照也起到試驗的質控作用，試劑蛻變和操作不妥均會發生"試驗無效"的效果。

 b.標本/陰性對照比值在比賽法ELISA試劑盒中，陰性孔呈色深于陽性孔。陰性呈色的強度取決于反應中酶結合物的濃度和參與比賽抑制物的量，一般調理陰性對照的吸光度在1.0-1.5 之間，此時反應為靈敏。比賽法 ELISA 不易用自視判別效果，因肉眼很難區別弱陽性反應與陰性對照的顯色差異，一般均用比色計測定，讀出S、P 和N 的吸光值。核算方法首要也有兩種，即陽性判定值法和抑制率法。