淋巴細胞分離液是一種用于分離人外周血淋巴細胞的無菌、低內毒素水平的密度梯度分離液。其分離原理是根據血細胞的密度差異,通過離心使一定密度的細胞按相應密度梯度分布,從而將淋巴細胞從人外周血或臍帶血中分離出來。接下來為您介紹下淋巴細胞分離液分離白細胞方法步驟。
提供一個常規的方法供參考:
首先,需要注意的是在分離前使分離液恢復至室溫,離心時也應保持室溫,因為此條件下分離液的密度為標注密度。
1. 新鮮血(肝素抗凝20u/ml)+1640(無血清)培養液或PBS按照1:1 稀釋;
2. 在15ml或50ml塑料離心管中預先加入淋巴細胞分離液,使分離液:稀釋后血液=1:1;
3.小心的將稀釋后的血液加到分離液的上面;
4. 室溫 2600rpm 離心20分鐘;
5. 取出離心管,小心吸出白白的那一層,重懸于5倍體積的不*培養液或PBS中,混勻;
6.室溫 1500rpm 離心5分鐘;
7.吸棄上清,再加4ml不*培養液,混勻;
8.室溫 1000rpm離心5分鐘;
9.棄上清,用*培養液稀釋至2ml;
10.淋巴細胞記數;
11.按所需濃度及實驗目的稀釋細胞,種板。
淋巴細胞分離液可用于體外分離外周淋巴血細胞,也可以從其他來源中分離單核細胞,包括臍帶血細胞和骨髓細胞,適用于從血液及組織勻漿中分離所需細胞,在醫療和醫學生物中廣泛應用。其他人及動物多種比重細胞分離液。
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