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ELISA實驗方法:ELISA中必要的三個試劑

來源:通蔚試劑(上海)有限公司   2021年07月07日 09:09  

ELISA載體的形狀主要有三種:微量滴定板、小珠和小試管。以微量滴定板為常用,專用于EILSA的產品稱為ELISA板,國際上標準的微量滴定板為8×12的96孔式。為便于作少量標本的檢測,有制成8聯孔條或12聯孔條的,放入座架后,大小與標準ELISA板相同。
ELISA中有三個必要的試劑:免疫吸附劑、結合物和酶的底物等。

完整的ELISA試劑盒包含以下各組分:

(1) 已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑);

(2) 酶標記的抗原或抗體(結合物);

(3) 酶的底物;

(4) 陰性對照品和陽性對照品(定性測定中),參考標準品和控制血清(定量測定中);

(5) 酶聯物(結合物)及標本的稀釋液;

(6) 洗滌液;

(7) 酶反應終止液。

免疫吸附劑

已包被抗原或抗體的固相載體在低溫(2~8℃)干燥的條件下一般可保存6個月以上。有些不完整的試盒,僅供應包被用抗原或抗體,檢測人員需自行包被。以下簡述固相載體和包被過程。

固相載體
固相載體在ELISA測定過程中作為吸附劑和容器,不參與化學反應。可作ELISA中載體的材料很多,經常使用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有較強的吸附蛋白質的性能,抗體或蛋白質抗原吸附其上后仍保留原來的免疫學活性,加之它的價格低廉,所以被普遍采用。聚苯乙烯為塑料,可制成各種形式。

ELISA板的特點是可以同時進行大量標本的檢測,并可在特制的比色計上迅速讀出結果。現在已有多種自動化儀器用于微量滴定板型的ELISA檢測,包括加樣、洗滌、保溫、比色等步驟,對操作的標準化極為有利。聚苯乙烯經射線照射后,其吸附性能特別是對免疫球蛋白的吸附性能增加,應用于雙抗體夾心法可使固相上抗體量增多,但用于間接法測抗體時空白值較大。

良好的ELISA試劑盒板應該是吸附性能好,空白值低,孔底透明度高,各板之間、同一板各孔之間、同一板各孔之間性能相近。聚苯乙烯ELISA板由于原料的不同和制作工藝的差別,各種產品的質量差異很大,因此,每一批號的ELISA板在使用前須事先檢查其性能。常用的檢查方法為:以一定濃度的人IgG(一般為10ng/ml)包被ELISA板各孔,洗滌后每孔內加入適當稀釋度的酶標抗人IgG抗體,保溫后洗滌,加底物顯色,終止酶反應后,分別測每孔溶液的吸光度。控制反應條件,使各孔讀數在吸光度0.8左右。計算全部讀數的平均值。所有單個讀數與全部讀數的均數之差,應小于10%。

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