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實驗結果
1.MC3T3-E1/bEnd.3細胞共培養體系的建立
取復蘇后3 ~ 6 代生長狀態良好的MC3T3-E1細胞，胰酶消化制成單細胞懸液，進行細胞計數，將細胞密度調整至2×105/mL后將1 mL 細胞懸液均勻接種于6孔板。利用孔徑0.4 µm 的Transwell小室建立非接觸的細胞共培養系統。
1、共培養條件下微血管內皮細胞促進成骨細胞的增殖。
在共培養 0 h、24 h、48 h、72 h 的4個時間點，對兩組MC3T3-E1細胞樣本進行CCK-8檢測(圖1)。從生長曲線可以看出，對照組和共培養組 MC3T3-E1 細胞的細胞活性均隨著時間延長而增加，但共培養組 MC3T3-E1 細胞的細胞活性增加更明顯，并且在共培養 48 h 和 72 h 兩個時間點兩組差異有統計學意義 (P < 0.05)。
PI 單染流式細胞術的檢測結果表明 ，與 bEnd.3 共培養之后，MC3T3-E1 細胞周期中 3 個時期的比例出現顯著變化。
Western blotting 的結果證實 ，與 bEnd.3 共培養之后，MC3T3-E1 細胞的 PCNA 蛋白表達水平顯著升高 (P < 0.01)，表明 MC3T3-E1細胞的增殖能力較對照組顯著增強。
2、共培養條件下微血管內皮細胞抑制成骨細胞的凋亡 。
Annexin V-FITC/PI 雙染流式細胞檢測結果表明 (圖 4)，與bEnd.3 共培養之后，MC3T3-E1細胞的凋亡率顯著下降 (P < 0.05)。
與 bEnd.3 共培養之后，MC3T3-E1細胞的凋亡率顯著下降 (P < 0.05)。采用 Westernblotting 檢測凋亡相關因子 Bax、Cleaved Caspase-3的表達變化 ，結果顯示，與對照組相比，共培養組 MC3T3-E1 細胞 Bax、Cleaved Caspase-3 的表達水平顯著降低 (P<0.05)。
上述結果顯示，在Transwell 共培養條件下，bEnd.3 能夠抑制 MC3T3-E1 細胞的凋亡。
本 研 究 利 用 Transwell 小 室 ， 構 建 bEnd.3/MC3T3-E1 共培養體系。研究表明，在 Transwell 小室共培養條件下，微血管內皮細胞 bEnd.3 能夠顯著促進成骨細胞MC3T3-E1 的增殖，并抑制其凋亡。這為防治骨質疏松、構建血管化組織工程骨選擇合適的微血管內皮細胞提供了理論依據，并進一步加深了微血管內皮細胞對成骨細胞功能調控的理解。
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