高效液相色譜—熒光檢測(cè)器（天瑞儀器）；雙酚A標(biāo)準(zhǔn)品(Dr. Ehrenstorfer GmbH公司)；甲醇(TEDIA公司，色譜純)；水(娃哈哈公司，1.25 L瓶裝純凈水)。

雙酚A標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(1 000 mg/L)：精密稱取10.0 mg雙酚A標(biāo)準(zhǔn)品到10 mL容量瓶中，用甲醇作溶劑溶解，定容，混勻。

雙酚A標(biāo)準(zhǔn)中間液(10.0 mg/L)：移取雙酚A標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0.10 mL于10 mL容量瓶中，用50%甲醇溶液稀釋到刻度，4℃避光冷藏，至少可存放4周。

雙酚A標(biāo)準(zhǔn)使用液(0.10 mg/L)：移取10.0 mg/L雙酚A標(biāo)準(zhǔn)中間液0.10 mL于10 mL容量瓶中，用水稀釋到刻度，臨用時(shí)配制。

校準(zhǔn)曲線系列：用純水分別稀釋雙酚A標(biāo)準(zhǔn)使用液，得到0.0、0.002、0.005、0.01、0.02和0.04 mg/L校準(zhǔn)曲線系列溶液。

用移液器將1 mL水樣移入塑料離心管中，在離心機(jī)中以轉(zhuǎn)速為12 000轉(zhuǎn)/min離心15 min后，轉(zhuǎn)移到進(jìn)樣小瓶，上機(jī)測(cè)定。

色譜柱：C18反相色譜柱(天瑞儀器公司，型號(hào)Eclipse XDB，4.6×250 mm，5 μm)，柱溫35℃；流動(dòng)相：甲醇/水(體積比70/30)，流速為1.0 mL/min；進(jìn)樣量100 μL；熒光激發(fā)波長(zhǎng)為228 nm，發(fā)射波長(zhǎng)為312 nm。

校準(zhǔn)曲線溶液與樣品溶液依次進(jìn)樣，記錄峰高或峰面積，以校準(zhǔn)曲線溶液的峰高或峰面積為縱坐標(biāo)，BPA含量(ng)為橫坐標(biāo)繪制校準(zhǔn)曲線，從校準(zhǔn)曲線上查出水樣中BPA含量。

BPA溶于甲醇，幾乎不溶于水(21.5℃下溶解度＜0.1 g/100 mL水)，故用甲醇配制儲(chǔ)備液。待測(cè)樣為水樣，選擇純水作為校準(zhǔn)曲線溶液的溶劑。標(biāo)準(zhǔn)中間液(10.0 mg/L)的濃度介于儲(chǔ)備液(1 000 mg/L)與標(biāo)準(zhǔn)使用液(0.10 mg/L)之間，采用甲醇水混合溶液作溶劑。對(duì)標(biāo)準(zhǔn)中間液(10.0 mg/L)每7 d測(cè)定1次(測(cè)定前稀釋到1.0 mg/L)，連續(xù)4次，測(cè)定結(jié)果分別為10.12、9.93、9.95與10.08 mg/L，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.94%。這表明4℃避光保存條件下，標(biāo)準(zhǔn)中間液4周內(nèi)無衰減。

選擇常用的甲醇與水的混合溶液作為流動(dòng)相。隨著水相比例的提高，保留時(shí)間延長(zhǎng)，峰高降低。當(dāng)水相比例為30%時(shí)，保留時(shí)間為6.0 min；水相比例為35%時(shí)，保留時(shí)間為8.2 min，峰高降低到原來的74.1%。為了提高方法的靈敏度，在無干擾情況下，應(yīng)盡量縮短保留時(shí)間，故本方法選擇水相比例為30%。取空白樣品加標(biāo)，使加標(biāo)后濃度為0.01 mg/L，加標(biāo)樣品的色譜圖見圖 2。

1.死體積峰(1.9 min)；2.雙酚A(6.0 min)圖 2 濃度為0.01 mg/L加標(biāo)樣品的色譜圖

圖選項(xiàng)

首先采用常用的230 nm作為激發(fā)波長(zhǎng)，掃描得到發(fā)射波長(zhǎng)光譜圖(圖 3)，由圖 3選定312 nm為靈敏發(fā)射波長(zhǎng)。然后固定發(fā)射波長(zhǎng)，掃描激發(fā)波長(zhǎng)，得到激發(fā)波長(zhǎng)光譜圖(圖 4)，由圖 4選定228 nm為靈敏激發(fā)波長(zhǎng)。文獻(xiàn)采用的激發(fā)波長(zhǎng)/發(fā)射波長(zhǎng)有275 nm/313 nm，275 nm/305 nm，由于不是靈敏的波長(zhǎng)，所以其線性范圍低點(diǎn)的濃度僅能達(dá)到0.03 mg/L[7-8]。

圖 3 BPA的熒光發(fā)射波長(zhǎng)光譜圖

圖選項(xiàng)

圖 4 BPA的熒光激發(fā)波長(zhǎng)光譜圖

圖選項(xiàng)

100 μL定量環(huán)是高效液相色譜儀的標(biāo)準(zhǔn)配置。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，隨著進(jìn)樣體積為10、20、50、100 μL逐步增大，其色譜峰峰高、峰面積線性提高，而半峰寬、保留時(shí)間及拖尾因子沒有明顯變化。為了獲得最高靈敏度，選擇100 μL作為進(jìn)樣體積。

在色譜進(jìn)樣前，被測(cè)水樣，尤其對(duì)水源水，要除去樣品中的懸浮物。過濾法與離心法是常用的兩種方法。試驗(yàn)中取0.01 mg/L標(biāo)準(zhǔn)溶液1 mL分別裝到3個(gè)進(jìn)樣小瓶中，然后分別采用了過濾(尼龍膜針式濾器)、離心(塑料離心管)及無處理3種方式。結(jié)果表明針式濾器濾膜把待測(cè)物全部吸附，塑料離心管對(duì)待測(cè)物無任何干擾。

BPA線性范圍在0~0.04 mg/L之間，其進(jìn)樣絕對(duì)質(zhì)量(ng)與峰高、峰面積呈線性。線性方程分別為Y=0.782X，Y=13.2X。線性相關(guān)系數(shù)r均為0.999。

濃度為0.002 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)進(jìn)樣10次，求出BPA峰高的標(biāo)準(zhǔn)偏差(Sb)，乘以10倍的信噪比，再除以校準(zhǔn)曲線的斜率(S)，得到低檢測(cè)濃度(LOQ)為0.0011 mg/L。本方法低檢測(cè)濃度為0.002 mg/L。

在純凈水中添加不同體積BPA溶液，制成3個(gè)濃度水平的樣品，其濃度分別為0.002、0.01和0.02 mg/L，每個(gè)濃度水平樣品平行測(cè)定6次。其3個(gè)濃度水平的平均回收率在95%~105%之間。相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)＜2%(n=6，表 1)。

用本方法對(duì)江蘇省南京市5個(gè)水廠(南京北河口、南京上元門、南京城南、南京城北、南京浦口)出廠水水樣進(jìn)行檢測(cè)，均未檢出BPA。

對(duì)本單位實(shí)驗(yàn)室10份末梢水進(jìn)行檢測(cè)，未檢出BPA，說明塑料輸配水管材不會(huì)對(duì)自來水造成污染。然而對(duì)實(shí)驗(yàn)室、辦公室的臺(tái)式飲水機(jī)放出的開水冷卻后進(jìn)行檢測(cè)，檢出BPA濃度為16.7 ng/mL，超出*67%。可見，臺(tái)式飲水機(jī)會(huì)造成BPA污染，建議今后應(yīng)在飲水機(jī)類涉水產(chǎn)品的檢測(cè)中增加BPA檢測(cè)項(xiàng)目。

“雙酚A奶瓶事件”引起社會(huì)對(duì)BPA高度關(guān)注。已報(bào)道的水中BPA的檢測(cè)方法都要進(jìn)行樣品富集，這樣一方面增加了工作量，另一方面導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果偏差增大。本實(shí)驗(yàn)從儀器檢測(cè)波長(zhǎng)、進(jìn)樣量、流動(dòng)相比例等方面進(jìn)行了充分優(yōu)化，使儀器檢測(cè)靈敏度大大提高，從而避免了樣品富集步驟。本方法快速、靈敏、準(zhǔn)確性高，可適用于水源水及生活飲用水監(jiān)測(cè)。