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吉姆薩染色液(Giemsa stain,1:9,染色體專用)說明書

來源:青島捷世康生物科技有限公司   2021年07月27日 10:58  

產(chǎn)品簡介:

Giemsa Stain以進口的姬姆薩色素、甲醇為主要原料,含*襯染劑,經(jīng)研磨配制而成,能呈現(xiàn)出清晰的細胞染色效果,經(jīng)常用于組織切片、血液和細胞涂片、細菌、染色體顯帶、原生動物寄生蟲等染色。吉姆薩色素(又稱姬姆薩色素)是由天青Ⅱ與伊紅混合而成,Giemsa染色原理和結果與瑞氏染色基本相同,姬姆薩染色液對胞漿著色力較強,能較好的顯示胞漿的嗜堿性程度,特別是對血液和骨髓細胞中的嗜天青、嗜酸性、嗜堿性顆粒,著色清晰,但是對胞核著色偏深,核結構顯色不佳,故姬姆薩染液常與瑞氏染 液聯(lián)合使用。

許多染料對DNA都有不同程度的親和性,故都可用作染色體的染色。在染色體的常規(guī)染色中,一般用吉姆薩、地衣紅、福爾根、石碳酸復紅等都可獲得良好的染色效果。G顯帶技術是指將染色體玻片標本經(jīng)過胰蛋白酶處理后,再用吉姆薩進行染色,使每條染色體沿其長軸顯示出一定數(shù)量的、寬窄和深淺不同的橫紋,即帶型。由于人類22 種常染色體和X、Y 染色體的帶型各具特征,根據(jù)帶型可清楚地分辨出每條染色液。GiemsaStain(1:9,染色體專用)由10×儲存液和磷酸鹽緩沖液組成,1:9 混合后使用,主要用于染色體G帶染色。 

自備材料:

1.PHA、秋水仙素

2.0.075M 溶液

3.恒溫培養(yǎng)箱

4.甲醇乙酸固定液(甲醇:冰乙酸=3:1)

5.載玻片、顯微鏡

操作步驟(僅供參考):

1、配制 Giemsa Stain 工作液:按試劑(A):試劑(B)=1:9 混合,即取1份 Giemsa Stain 儲存液(10×)加入到9份的磷酸鹽緩沖液中充分混勻,即為GiemsaStain工作液,該工作液為即用型試劑,不易保存,即用即配。如效果不佳,可改變配制比例。

2、培養(yǎng):取人類外周血3~5ml在PHA(一般工作濃度約60ug/ml)、血清等條件下體外培養(yǎng)3天,加入BrdU和(或)秋水仙素(一般工作濃度約0.5ug/ml),培養(yǎng)30~60min并收集細胞即2000g離心5min,留取沉淀。

3、低滲:加入5~8ml提前37℃預熱的0.075M溶液37℃低滲處理20~30min。

4、固定:加入1ml新配制的甲醇乙酸固定液,輕輕混勻,2000g離心5min,留取沉淀;再次加入2~3ml甲醇乙酸固定液,輕輕混勻,室溫固定15~20min,2000g離心5min,留取沉淀;再次加入2~3ml 甲醇乙酸固定液,重復該步驟,留取沉淀。

5、滴片:加入少許甲醇乙酸固定液至沉淀中,輕輕混勻制成細胞懸液。滴加2~3滴細胞懸液于提前遇冷的載玻片上,吹散水蒸氣熏蒸促使細胞破裂(亦可高空垂直滴下細胞懸液促使細胞破裂),70℃烤片2h。

6、消化:用0.025~0.05%的胰蛋白酶溶液處理載玻片30~90min,依據(jù)胰蛋白酶的濃度、批次等摸索處理時間。

7、染色:滴加Giemsa Stain工作液覆蓋玻片,室溫染色15~30min。

8、用自來水或蒸餾水緩慢從載玻片一端沖洗,將多余染色液沖掉??諝飧稍?。

9、先用低倍鏡瀏覽整張玻片標本,找到分散良好且染色體長短適中的分裂相,再用油鏡觀察并識別染色體G顯帶核型。

注意事項:

1、涂片染色中Giemsa染色后,請勿先去除染液或直接對涂片用力沖洗。

2、如果染色過深或過淺,應調(diào)整染色時間或工作液濃度。

3、pH 值對染色有一定影響,載玻片應清潔、無酸堿污染,以免影響染色效果。

4、染色液經(jīng)稀釋后液面有金屬光澤則表示染液有染色作用,否則染色液可能失效。

5、染色液可重復使用,但不能多次重復,若有沉淀物應過濾后使用。 

 

 

 

有效期:24個月有效。 


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