ELISA試劑盒標準曲線做欠好的原因分析,剛剛觸摸Elisa實驗,研討雞透明質酸(HA)相關目標的實驗,做完雞透明質酸(HA)實驗后反應標準曲線的梯度都欠好。剛加完顯色劑的時分梯度還算明顯,但是顯色比較淺,跟著時刻延伸(大約6、7分鐘)往后梯度就不明顯了。停止反應后測得的值梯度就沒有了。
為此,我公司技術員對ELISA試劑盒標準曲線做欠好的原因做出分析:
1. 剛加完顯色劑時梯度明顯:顯色液可能是從高濃度向低濃度孔加的。
2. 酶濃度太高,導致zui終顯色結果都是高的。
3. 包被-酶標系統不匹配或許酶標的非特異反應太強,或許酶標儀讀數規劃不夠。
4. 樣本中有可以催化底物的物質,沒洗下來。
5. 建議:包被、酶標重新做梯度,先用較低的濃度把梯度探究好,然后再優化靈敏度,zui終調出所需的靈敏度、線性規劃.
6. 有條件的話,可以把酶免的蛋白系統移植到板式化學發光上,加完底物三分鐘讀數。
7. 蛋白系統靈敏度夠的話,顯色十分鐘就差不多了。
8. 酶是自己標的這種情況的,HRP比例不要太高。
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