脂質體介導轉染實驗指的是,脂質包裹待轉染DNA形成復合體,與細胞膜融合或內吞,進入細胞。然而,大量的脂質體-DNA復合體,只有一小部分能運送到細胞質并進入細胞核中。
如何提高脂質體介導轉染效率的關鍵,就在這一步:提高復合體進入細胞質的效率。
1、避免使用陰離子試劑,使用新一代聚陽離子試劑,適用范圍廣,毒性相較以前的脂質試劑小。
2、使用陽離子脂質與DNA的*佳比例,以及一定數量細胞的陽離子脂質用量。可向購買試劑的公司進行詢問。
這是因為過量的脂質容易受到培養皿中其他帶電荷物質的干擾,如細胞外基質中的硫酸軟骨素。
3、待轉染的培養細胞應該從凍存庫中重新培養。轉染過程中,細胞在匯合狀態不應超過24小時,單層細胞應處于對數中期。
4、轉染過程中,培養基不建議加入抗生素。轉染試劑使細胞通透性增加,進入細胞的抗生素濃度增加,會產生一定的細胞毒性。
5、某些血清蛋白可能會干擾脂質體-DNA復合體形成,因此應在無血清狀態下形成復合體,后續過程可添加血清。
6、提高待轉染基因的純度,DNA的260nm:280nm應為1.8 。
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