今天，為大家詳細總結原代細胞選材及培養的那些事，手把手教你輕松搞定細胞培養的難題! 原代細胞選是指具有分化為神經元、星形膠質細胞和少突膠質細胞的才干，能自我更新并能供應大量腦組織細胞的細胞群，具有自我更新才干和多向分化潛能，對危害和疾病具有反響才干。 原代細胞選的單細胞在24h內自動聚集成團，這是神經干細胞在體外培養進程中的一個重要特征。

養細胞難、養原代細胞更難、養原代神經干細胞難上加難!這是科研界*的現實，細胞培養是雜交瘤制備單克隆抗體進程中bi不可shao的實驗操作，細胞培養是一個困難重重的作業，多少英雄都在細胞培養上自掛東南枝!

進程一：傳代培養

1.在光鏡下調查細胞球中心已呈現灰黑色區域時進行傳代，將培養基轉移至15ml離心中，800r/min離心5min，棄上清。

2.參與0.125%胰酶+0.02%EDTA消化2-3min，參與胰酶抑制劑停止消化，悄然吹打神經球至至細胞懸液， 800r/min離心5min，棄上清。

3.參與適量干細胞培養液Neurobasal +1%N2+2%B27+20ng/ml bFGF，20ng/ml EGF(添加谷氨酰胺)，調整細胞濃度為5×105/ml，置于37℃，5%CO2持續傳代培養。

原代細胞選選材及培養

進程二：原代選材

血清標本可按常規方法采集，應留意避免溶血，紅細胞溶解時會開釋出具有過氧化物酶活性的物質，以HRP為標記的ELISA測定中，溶血標本可能會增加非特異性顯色。

如在冰箱中保留過久，其中的可發生聚合，在間接法ELISA中可使本底加深。本文將敘述板式ELISA各個操縱步驟的留意要點，國外試劑均與特殊儀器配合應用，嚴格遵照劃定操縱，必能得出正確的結果。

加樣時應將所加物加在LEISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并留意不可濺出，不可產氣憤泡。有此測定需用稀的血清，可在試管中按劃定的稀釋度稀釋后再加樣。

實驗影響因素

1.供體年歲的影響

實驗研討顯現，胚胎鼠大腦皮質中的神經干數量明顯高于重生鼠，且胎齡為12~15d左右的鼠胚胎體內的神經干的分化才干*。

2.分別辦法對細胞純度及生機的影響

常用的細胞分別辦法有機械分別法和酶消化分別法。機械分別法的缺點是吹力度和次數不易掌控，且機械切開作用會使細胞活性下降;酶消化法缺點是消化的時間不易把握，而且用于分別神經干細胞的消化酶對細胞具有潛在的危害作用。

3.接種密度對神經干的影響

原代細胞的適宜接種濃度一般可用1×10*8/L~1×10*9/L，接種細胞密度過小，細胞不成球，不利于細胞增殖;接種細胞密度過大，次傳代后很快呈現qu世、特大、散亂、單細胞數敏捷增多。選用半量換液的辦法可以zui大程du地使細胞生存環境堅持穩定,有利于細胞生長。

4.傳代培養機遇的影響

原代細胞通過原代培養后中，細胞數量大量增殖，必將導致大部分神經干細胞因缺乏營養而qu世，因而及時進行傳代是防止其qu世的要害，有文獻報道一般選用原代培養5~7 d時進行，既可防止細胞過度增殖而qu世, 又堅持細胞增殖的活性。

注意事項

1.為維持選材進程中的細胞活性，在選材整個進程中應都在冰上進行而且在剝離腦膜和血管組織中要在含有10%FBS高糖培養基中，因為胎鼠神經干代謝旺盛，長時間在無糖環境對神經干構成危害。

2.在選材進程中，不要取一個皮層，剝離一個腦膜血管，而是快速將全部胎鼠皮層取下來，放到高糖培養基中。

3.剝離腦膜及血管應悉數分別干凈，否則在制造單細胞懸液時，會被bi加大吹打力氣和次數，構成細胞危害。

4.在培養進程中，為防止細胞貼壁分化，隔天悄然晃動培養基。

5.防止細胞污染。加強無菌操作知道，做好實驗室、實驗器械等的消毒作業。

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