多色流式實驗的意義

流式多色實驗幫助研究者得到更精細的細胞分群和更精準的細胞特性分析。鑒于多色流式在科研中應用越來越廣泛，多色流式實驗結果和機器的直接相關性和緊密性，我們必須充分了解流式細胞儀，根據流式細胞儀的性能參數，試劑特性，抗原表達特點，來設計符合實驗目的的*流式實驗方案，提高流式數據可靠性與準確性。

BD流式細胞儀

BD FACSCanto™ 3激光10色		BD LSR Fortessa™ X-20 5激光18色
BD FACSVerse™ 3激光8色		三角和八角檢測器

1、機器試劑一站式解決方案第一步：充分了解流式細胞儀

流式細胞儀的狀態（Cytometer Performance）直接關系多色流式的結果，所以機器的日常維護和質控是非常重要的。

Initial Setup of a Cytometer

Daily Workflow

讓我們先從解讀機器質控報告 Cytometer Setup & Tracking（CST）Report 開始了解機器。

  • rSDEN：Robust standard deviation of electronic noise ；
  • Qr：Relative detection efficiency for each detector；
  • Br：Relative optical background；
  • rCV：Robust coefficient of variation for each setup bead；

Cytometer Performance-CS&T

2. 機器試劑一站式解決方案第二步：不能不了解的參數

分辨率（Resolution）：衡量流式細胞儀區分弱染色信號和未染色信號程度的參數

染色指數（Stain Index）：不同熒光標記抗體在特定機器上分辨率的度量標準

3. 機器試劑一站式解決方案第三步：設計panel，優化panel

人外周血8色T細胞Panel設計

   流式細胞儀：BD canto II 4 Blue-2 Red-2 Violet
   檢測指標： CD3 CD4 CD8 CD25 CD127 CD45RA CD27 CCR7

Panel優化前后對比：

BD HorizonTM 新熒光

BD HorizonTM Brilliant Blue 515:
點亮您的藍激光，FITC 通道的最佳替代染料
亮度約是FITC 的7 倍，和PE 通道有更小的溢漏

BD HorizonTM PE-CF594:
以亮度上的絕對優勢，可替代PE-Texas Red® /ECD/PE-Alexa Fluor® 610

BD HorizonTM Brilliant Violet 家族:
讓您的紫激光充分運行起來
BV421 BV510 BV605 BV650 BV711 BV786 BV421
比PE 更亮，弱表達抗原的第一選擇，可替代BD HorizonTM V450, eFluor450,Pacific BlueTM

BD HorizonTM Brilliant UltraViolet :
355 激光管的新選擇
BUV395 BUV496 BUV661 BUV737 BUV805