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透射電鏡觀察細(xì)胞樣品實(shí)驗(yàn)檢測服務(wù)
一、 透射電鏡觀察細(xì)胞樣品實(shí)驗(yàn)檢測服務(wù)實(shí)驗(yàn)儀器與試劑
表格一：實(shí)驗(yàn)儀器
儀器 |
透射電子顯微鏡 |
超薄切片機(jī) |
表格二：試劑
試劑 |
PBS（pH7.4） |
無水乙醇 |
丙酮 |
1%鋨酸 |
Pon812包埋套裝 |
醋酸雙氧鈾 |
醋酸鉛 |
二、 實(shí)驗(yàn)步驟
1. 醛類固定：加入1mL 2.5%戊二醛溶液（PBS 稀釋），4度固定過夜；
2．清洗：用PBS清洗4次，每次靜置15min；
3．鋨酸固定：用1%鋨酸溶液 4度固定2h；
4．清洗：用PBS清洗4次，每次靜置15 min；
5．脫水：用50%、70%、80%、90%乙醇梯度脫水各靜置15min(在70%乙醇中靜置過夜)，再用100%乙醇脫水2次，每次靜置20min；
6．置換：用丙酮置換2次，每次靜置15min；
7. 浸漬：過程如下：
A．丙酮：包埋劑=2：1（體積比）的浸漬液中浸漬1h；
B．丙酮：包埋劑=1：2（體積比）的浸漬液中浸漬4h；
C．純包埋劑浸漬2次, 每次24h；
8． 包埋：將樣品放入盛有純包埋劑的包埋板中；
10．聚合：將包埋板置于65℃條件下各聚合48h以上；
11．修塊：將包埋頭修成梯形，且樣品表面積小于0.2mm×0.2mm；
12．超薄切片：切片厚度70nm；
13．染色：醋酸雙氧鈾染色 10min后清洗；
醋酸鉛染色 10min后清洗；
14. 上機(jī)檢測。
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