三级片视频播放,精品三级片在线观看,A级性爱视频,欧美+日韩+国产+无码+小说,亲子伦XX XX熟女,秋霞最新午夜伦伦A片黑狐,韩国理伦片漂亮的保拇,一边吃奶一边做边爱完整版,欧美放荡性护士videos

產品推薦:氣相|液相|光譜|質譜|電化學|元素分析|水分測定儀|樣品前處理|試驗機|培養箱


化工儀器網>技術中心>解決方案>正文

歡迎聯系我

有什么可以幫您? 在線咨詢

如何從培養細胞中制備細胞核基質/中間纖維骨架結構?

來源:深圳市安培生物科技有限公司   2021年11月18日 12:47  

材料與儀器

細胞
Tritron X-100 抽提緩沖液
電子顯微鏡

步驟

1. 在 4℃ 用 PBS 洗細胞一次。

2. 在 4℃ 用含 0.5% Tritron X-100 的細胞骨架緩沖液抽提細胞 3 到 5 分鐘。直到消化步驟,每 107 個細胞最少要用 1 ml 緩沖液,以后減半。

3. 在 4℃ 用抽提緩沖液抽提細胞 3~5 分鐘。這一步去除組蛋白 H1 和除中間纖維蛋白之外的細胞骨架蛋白。另外,這一步也可在 DNA 酶消化步驟(第 4 步)之后作,這樣也不會引起超微結構的變化。

抽提緩沖液:

10 mmol/L PIPES,pH 6.8

250 mmol/L 硫酸銨

300 mmol/L 蔗糖

3 mmol/L MgCl2

1 mmol/L EDTA

4. 在含 0.5% Triton X-100 的消化緩沖液中用無 RNA 酶的 DNA 酶消化以去除染色質 DNA 酶濃度為 200~400 單位/ml,32℃ 反應 30~50 分鐘。

含 0.5% Triton X-100 的消化緩沖液:

10 mmol/L PIPES,pH 6.8

300 mmol/L 蔗糖

50 mmol/L NaCl

3 mmol/L MgCl2

1 mmol/L EGTA

5. 用抽提緩沖液清洗樣品兩次,每次 5 分鐘。

6. (可選)樣品在 4℃ 用 2 mol/L NaCl 抽提 3~5 分鐘。這一步能使可能形成核基質核心的 10 nm 纖絲分支顯形(Jackson and Cook 1988; He et al, 1990)。在第 4 步中用 Hae Ⅲ 和 Pst Ⅰ(每種酶 400 單位/ml)代替 DNA 酶 Ⅰ 可以使核心纖絲保存的更好。

2 mol/L NaCl 緩沖液:

10 mmol/L PIPES,pH 6.8

300 mmol/L 蔗糖

2 mol/L NaCl

3 mmol/L MgCl2

1 mmol/L EGTA

7. 固定核基質以進行免疫熒光檢測或電子顯微鏡檢測。


免責聲明

  • 凡本網注明“來源:化工儀器網”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網絡有限公司-化工儀器網合法擁有版權或有權使用的作品,未經本網授權不得轉載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經本網授權使用作品的,應在授權范圍內使用,并注明“來源:化工儀器網”。違反上述聲明者,本網將追究其相關法律責任。
  • 本網轉載并注明自其他來源(非化工儀器網)的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網贊同其觀點和對其真實性負責,不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網站或個人從本網轉載時,必須保留本網注明的作品第一來源,并自負版權等法律責任。
  • 如涉及作品內容、版權等問題,請在作品發表之日起一周內與本網聯系,否則視為放棄相關權利。
企業未開通此功能
詳詢客服 : 0571-87858618
主站蜘蛛池模板: 潼关县| 华亭县| 天祝| 洛南县| 龙井市| 浪卡子县| 林口县| 石门县| 青浦区| 新乡市| 平罗县| 行唐县| 苏尼特左旗| 苗栗县| 钦州市| 滨州市| 视频| 柏乡县| 石家庄市| 自治县| 公安县| 汉中市| 闻喜县| 即墨市| 孝感市| 扶绥县| 建昌县| 太谷县| 茌平县| 松原市| 兴安县| 邓州市| 任丘市| 寿光市| 修武县| 拉萨市| 南川市| 永康市| 察雅县| 汝城县| 延边|