手機版
化工儀器網手機版
化工儀器網小程序
官方微信
公眾號：chem17
掃碼關注視頻號
材料與儀器
尾部緩沖液 蛋白酶 K
離心管 玻璃棒
步驟
第 1 天
1. 大約 1.5 cm 長的尾部活檢樣品放在一個 1.5 ml 盛有 0.7 ml 尾部緩沖液的小離心管中，加 35 ul 10 mg/ml 蛋白酶 K，在 55℃ 振搖溫育過夜。
尾部緩沖液（配 25 ml）
50 mmol/L Tris，pH 8 1.25 ml 1 mol/L Tris，pH 8
100 mmol/L EDTA，pH8 5 ml 0.5 mol/L EDTA，pH 8
100 mmol/L NaCI 0.5 ml 5 mol/L NaCI
1% SDS 1.25 ml 20% SDS
存放于室溫。
蛋白酶 K：10 mg/ml 水溶液，貯存于 -20℃。
第 2 天
2. 加 7 ul 10 mg/ml RNA 酶（不含 DNA 酶），在 37℃ 孵育 1~2 小時。
3. 在微量離心機中對樣品離心 20 分鐘以沉淀鼠毛。
4. 小心轉移 0.5 ml 上清，注意不要攪動沉淀。
5. 在管子中加 0.5 ml 異丙醇并通過翻轉輕輕地進行混合。應該立即有線狀沉淀形成。
不要劇烈混合。不要使 DNA 形成緊密團塊，否則會難以繞纏。
6. 在 Bunsen 燈的火焰上加熱封閉 100 ul 玻璃小吸管的末端。
7. 把末端封閉的小吸管浸到 DNA 溶液中并劇烈攪拌來纏繞 DNA。一直攪動吸管直到 DNA 緊緊地纏繞到上面。
8. 洗 DNA 是在三個順序排列的盛大約 50 ml 乙醇的燒杯中各浸 10 次（1 個是 70% 乙醇，另 2 個是 100% 乙醇）。洗 5~8 個樣品后換洗滌溶液。
9. 用一片膠帶標記玻棒末端，把它插在（DNA 端朝上）一塊橡皮泥，使風干 10~15 分鐘。
10. 用鉆石記號筆在黏附了 DNA 的那一末端刻線，弄斷玻棒，把帶 DNA 的那段放到已作標記的微量離心管中。
11. 加 0.5 ml TE ( pH 8 )。樣品在室溫下振蕩過夜。
第 3 天
12. 稍稍振蕩管子，用干凈鑷子拿掉玻璃棒（在不同樣品的操作之間燒一下鑷子）： 繼續振搖 1~2 小時。（如果樣品只是用來進行 PCR 分析，玻棒可以留在管子里）。
13. 以 1:10 稀釋樣品，測 OD260 值以確定濃度（1 OD260=50 ug/ml).
14. DNA 貯存在 4℃。
相關產品
免責聲明
- 凡本網注明“來源：化工儀器網”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網絡有限公司-化工儀器網合法擁有版權或有權使用的作品，未經本網授權不得轉載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經本網授權使用作品的，應在授權范圍內使用，并注明“來源：化工儀器網”。違反上述聲明者，本網將追究其相關法律責任。
- 本網轉載并注明自其他來源（非化工儀器網）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網贊同其觀點和對其真實性負責，不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網站或個人從本網轉載時，必須保留本網注明的作品第一來源，并自負版權等法律責任。
- 如涉及作品內容、版權等問題，請在作品發表之日起一周內與本網聯系，否則視為放棄相關權利。
采購中心