葡聚糖凝膠C-25是顆粒狀，使用時需要溶脹，其溶脹比取決于所使用的緩沖溶液，不同溶液中的溶脹比不同，而且存在較大差異。溶脹時不能使用磁力攪拌，否則易導致凝膠破碎。
預處理:
稱取所需量的葡聚糖凝膠C-25，置于 50~100 倍蒸餾水或者上樣平衡液中，溶脹，室溫條件下一般需要溶脹1~2天，沸水中一般需要2小時。
按每克葡聚糖凝膠C-25加0.5（MHCl）15ml的比例，將葡聚糖凝膠C-25浸泡于0.5M、HCl中，攪勻，靜置30分鐘，裝入布氏漏斗（墊有2層濾紙）中抽濾，并反復用蒸餾水抽洗至pH呈中性；然后以0.5M、NaOH同上操作過程處理，最后以0.5M、HCl再處理一次。
裝柱：
裝柱按照標準操作規程操作。必須保證每種材料都處于工作溫度，凝膠裝柱前需要脫氣 。
平衡：
使用2~5倍柱床體積的上樣平衡液平衡柱子，務必使流出液的電導和pH同上樣緩沖液的
電導和pH*一致。
上樣：
根據目標產物濃度和凝膠的載量確定上樣量。
清洗：
上樣完畢后，再使用上樣緩沖液平衡柱子，清洗掉不結合的蛋白和雜質，直至流出液的電導和pH同上樣緩沖液的電導和pH*一致。
洗脫：
使用增大緩沖液中鹽離子濃度或者增加 pH 的連續洗脫或者梯度洗脫。
再生：
在柱上先用1~2M、NaCl洗去柱上的雜蛋白，再用蒸餾水洗去柱中鹽。然后按預處理過程將葡聚糖凝膠C-25再處理一遍即可。

存儲：
葡聚糖凝膠C-25干粉保存于4~25℃、干燥、通風、清潔處；溶脹后的凝膠保存于4~8℃
20%乙醇溶液或0.01M、NaOH中。