手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)小程序
官方微信
公眾號(hào)：chem17
掃碼關(guān)注視頻號(hào)
單細(xì)胞分離對(duì)于很多應(yīng)用場(chǎng)景如，單細(xì)胞測(cè)序，單克隆培養(yǎng)等而言是關(guān)鍵的前處理步驟，殊不知單細(xì)胞分離的前處理步驟也有很多需要注意的地方。下面我們就來了解一下，為了提高單細(xì)胞分離的效率和效果，都有哪些小竅門。
單細(xì)胞分離用于區(qū)分碎片、死細(xì)胞和活細(xì)胞，然后可以根據(jù)操作流程分離單個(gè)活細(xì)胞，為了去除細(xì)胞結(jié)團(tuán)，在染色之后可以用40um左右的細(xì)胞篩網(wǎng)過濾細(xì)胞，盡量保證在上樣的時(shí)候樣本都是單個(gè)細(xì)胞。
作為對(duì)照，我們采用細(xì)胞密度進(jìn)行手動(dòng)有限稀釋法鋪板。然后，用顯微鏡在明場(chǎng)下觀察每個(gè)孔的細(xì)胞（或者微球）的數(shù)量，同樣的實(shí)驗(yàn)持續(xù)7天，每天做一組對(duì)比實(shí)驗(yàn)，取平均值，通過統(tǒng)計(jì)孔板中單細(xì)胞、兩個(gè)細(xì)胞和空孔的數(shù)量來衡量?jī)x器的分選效率，可通過差速離心或密度梯度離心和過濾的方法，根據(jù)大小、形狀和密度對(duì)細(xì)胞進(jìn)行人工分離。
例如，通過各種密度梯度離心，可以從外周血或骨髓中分離出單核細(xì)胞，使用熒光染料可以從死細(xì)胞或凋亡細(xì)胞中標(biāo)記和分離活細(xì)胞，富集細(xì)胞亞群或稀有細(xì)胞類型時(shí)，可將標(biāo)記抗體基于磁珠的分離方法相結(jié)合進(jìn)行陽(yáng)性/陰性篩選。多種因素將影響方法的選擇，包括樣本類型、可用抗體種類和實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。
它可以快速識(shí)別可能會(huì)使下游步驟變得復(fù)雜的碎片、細(xì)胞雙聯(lián)體和細(xì)胞聚集物，更重要的是，準(zhǔn)確的細(xì)胞計(jì)數(shù)對(duì)于實(shí)現(xiàn)單細(xì)胞分離過程的目標(biāo)細(xì)胞通量至關(guān)重要，可以使用顯微鏡和血細(xì)胞計(jì)數(shù)器進(jìn)行手動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)，也可以使用自動(dòng)化系統(tǒng)進(jìn)行準(zhǔn)確的細(xì)胞計(jì)數(shù)，采集細(xì)胞懸液的明場(chǎng)圖像，根據(jù)細(xì)胞特征（例如大小、亮度和圓度）生成直方圖進(jìn)行更詳細(xì)的檢查。
在以上步驟完結(jié)之后，我們就能得到一個(gè)好的單細(xì)胞懸液了。最后我們用Namocell單細(xì)胞分離儀完成后面的單細(xì)胞分離工作，最快可以在1min以內(nèi)完成96孔板的鋪板，6min以內(nèi)完成384孔板的鋪板，并且整版單細(xì)胞效率高達(dá)90%左右。
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的，應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用，并注明“來源：化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源（非化工儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對(duì)其真實(shí)性負(fù)責(zé)，不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí)，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源，并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題，請(qǐng)?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
采購(gòu)中心