1.烤片: 將待做切片置于切片架上,于60℃恒溫烤箱中至少烤1 hr;石蠟包埋組織切片3~4μm 厚度
2.脫蠟: 切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟3 次(即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次10 min;
3.水化: 切片經下行酒精水化,無水乙醇5min,95%乙醇2 次(每次2min),85%乙醇2 min;75%乙醇2min,自來水沖洗,ddH2O 洗2×2min;
4.抗原修復: 根據抗體說明書推薦方法進行抗原修復,常采用高壓、微波(溫度達到98~100℃)或酶消化修復法,室溫自然冷卻,自來水沖洗,ddH2O 洗2×2min,TBS 洗滌(2×2min)(具體修復方法見附1)* 注:有些抗原勿需修復,
直接進入第5 步封閉。
5.封閉: 滴加試劑B,37℃濕盒孵育30 min;
6.加一抗:滴加用試劑C(即用型一抗),37℃濕盒孵育2 hr 或4℃過夜;
7.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
8.封閉: 滴加試劑B,37℃濕盒孵育10 min;
9.加二抗: 滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗(試劑D),37℃濕盒中孵育30 min;
10.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
11.封閉: 滴加試劑Tween 20,37℃濕盒孵育封閉20 min;
12.加HRP-SA: 滴加用抗體稀釋液稀釋的試劑E(1:50~200,終濃度5~20 nM),37℃濕盒中孵育30 min;
13.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min),TBS 洗滌(2×5 min);
14.顯色:應用DAB 溶液(試劑F)顯色;
15.復染:自來水充分沖洗,復染,脫水,透明;
16.封片: 待組織標本干后,用試劑緩沖甘油封固劑封片;
17.觀察成像: 顯微鏡下觀察成像。
糖尿病相關肽/胰島淀粉樣肽抗體
血管緊張素Ⅱ抗體
血管緊張素Ⅱ受體1抗體
血管生成素-1抗體
膜粘連蛋白5抗體
重組膜粘連蛋白5抗體
銜接蛋白α-Adaptin抗體
凋亡蛋白活性因子-1抗體(C端)
凋亡蛋白活性因子-1抗體(N端)
三磷酸腺苷結合轉運蛋白G超家族成員2抗體
載脂蛋白E抗體
淀粉樣肽前體蛋白抗體
水通道蛋白-2抗體
血管緊張素原抗體
雄激素受體抗體
細胞死亡調節蛋白抗體(凋亡、半胱胺酸蛋白酶激活抑制劑)
軸蛋白1抗體
自噬相關蛋白9B抗體
自噬相關蛋白12抗體
自噬相關蛋白13抗體
自噬相關蛋白3抗體
整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶4型抗體
磷酸化活化復制因子2抗體
磷酸化APP(Tyr757)淀粉樣肽前體蛋白抗體
絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶ATR抗體
去整合素樣金屬蛋白酶18抗體
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