CAT活性的相-抽提分析法

來(lái)源：深圳市安培生物科技有限公司 2021年12月16日 11:42

材料與儀器

轉(zhuǎn)染細(xì)胞
氯霉素 Tris·Cl TMPD 二甲苯
離心機(jī) 離心管培養(yǎng)箱

步驟

一、來(lái)源于哺乳動(dòng)物細(xì)胞

1. 按“CAT活性的層析分析法”中的步驟1~5的凍融法，制備哺乳動(dòng)物細(xì)胞提取物。如果用胰蛋白酶消化或制細(xì)胞方法來(lái)收集細(xì)胞，則將原位裂解法的步驟1至4用以下的步驟2至4代替。

2. 室溫下，300 g 離心5 min，棄去上清。每107細(xì)胞加入1 ml 低滲緩沖液，離心，棄上清。然后每107細(xì)胞加Triton裂解液200 μl。

二、來(lái)源于植物原生質(zhì)體

1. 室溫下，2 000~4 000 g 離心5 min，將植物原生質(zhì)體細(xì)胞收集于1.5 ml 的微量離心管中，棄去上清。

2. 往細(xì)胞沉淀加50 μl 低滲緩沖液，在旋渦混合器上劇烈振蕩，將離心管置于-70℃ 15 min以上，或置于干冰/乙醇浴中5 min 以凍結(jié)樣品。融解樣品，在室溫下13 000 g 離心2 min，將上清移入一個(gè)干凈管中。

3. 對(duì)于分析50 μl 細(xì)胞提取液，配置如下CAT分析混合液

20 μl 0.01 μCi/μl ［3H］氯霉素
5 μl 5 mg/ml 丁酰輔(酶)A
5 μl 2 mol/l Tris·Cl，pH8.0
20 μl H2O

4. 對(duì)每組分析，將50 μl CAT分析混合液加入50 μl 細(xì)胞提取液中。37℃溫育30~90 min。

5. 用200 μl 2：1的TMPD/二甲苯劇烈報(bào)蕩提取乙酰化的氯霉素，離心并移出上層液相至一只閃爍瓶中。

6. 樣品中加3~5 ml 閃爍液，計(jì)數(shù)測(cè)定CAT的活性。

同實(shí)驗(yàn)其他方法

CAT活性的層析分析法

1. 100 mm 培養(yǎng)皿中的轉(zhuǎn)染了CAT表達(dá)質(zhì)粒的貼壁細(xì)胞，用PBS洗兩次，每次5 ml每培養(yǎng)皿加入1 ml TEN溶液。將細(xì)胞置于冰浴5 min。 2. 用橡膠

原位裂解細(xì)胞的CAT分析法

1. 60 mm 培養(yǎng)皿中轉(zhuǎn)染了CAT表達(dá)質(zhì)粒的細(xì)胞，用2 ml PBS洗1次。每培養(yǎng)皿加入2 ml 低滲緩沖液，在室溫下溫育2~5 min。 2. 吸去低滲緩沖液，加入400 μl T

人生長(zhǎng)激素的放射免疫分析法

1. 取轉(zhuǎn)染了hGH表達(dá)質(zhì)粒的哺乳動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)液100~500 μl。 2. 加100 μl 培養(yǎng)液或標(biāo)準(zhǔn)品至12 mm×75 mm 圓底試管中。加入100 μl 125I-

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安培生物堅(jiān)持為生命科學(xué)研究、活體動(dòng)物轉(zhuǎn)染、大規(guī)模生物生產(chǎn)、基因和細(xì)胞治療領(lǐng)域客戶，提供*細(xì)胞體內(nèi)可代謝的核酸轉(zhuǎn)染試劑；inviCELL™Platelet lysate無(wú)動(dòng)物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細(xì)胞擴(kuò)增和生產(chǎn)，包括培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞和多種免疫細(xì)胞系等，為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務(wù)；提供以植物生物為平臺(tái)基因序列全人源化、*的細(xì)胞培養(yǎng)可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品；提供內(nèi)毒素≦ 1.0 EU/mL、對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專注為生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)，努力發(fā)展為基因治療、細(xì)胞治療的生物科技企業(yè)。

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