生物材料準備

    生物材料凍存前進行的準備工作可能會對凍存結果產生影響。對于非復制性材料，如組織，核酸和蛋白等，準備過程包括確認生物材料處于合適的溶液或凍存培養基中，此步驟的目的在于復蘇時達到理想的預期用途。然而，活細胞和微生物的穩定性及復蘇活力受生長條件和凍存前準備工作的影響。

    細胞凍存前需考慮多種因素，包括細胞類型、活力、生長條件、生理狀態、數目以及細胞前處理等。當建立一個新分離株或細胞系的初次種子儲備時，必須對培養物進行檢測并消毒，確保微生物污染的最小化。每次準備工作后，以及每次準備新批次的培養物時，均要重復這個步驟。

微生物

    生長于通氣培養條件下的微生物細胞，特別是細菌和酵母，表現出比生長于非通氣條件下的細胞更強的耐受冷卻和凍存傷害 的能力。T.Nei 認為，在通氣培養條件下，細胞通透性更好，且開放條件下培養細胞在冷卻過程中比非通氣條件下培養的細胞失水更快。另外，針對微生物細胞，在對數生長期后期及穩定期早期獲得的細胞表現出更強的冰凍耐受性。從生長后期和靜態培養早期收集的微生物細胞比生長早期和生長晚期的細胞表現了更強的冰凍耐受性。

    一般來講，初始凍存的細胞數目越多，復蘇率越高。對于大多數細菌和酵母而言，保證約 107/ml 的細胞數才能確保足夠數量的細胞復蘇。由于這些細胞可便捷地從瓊脂培養板或斜面上收集，如果需要更大量的細胞，也可使細胞生長于液體培養基中通過離心收集，在任何一種情況下，細胞通常懸浮在包含凍存保護劑的新鮮培養基中。原生生物可以通過離心濃縮，但通常需要懸浮于使用的培養基中，之后使用等體積含凍存保護劑的新鮮培養基稀釋。

    針對芽孢菌凍存，需要收集芽孢并重懸于含凍存保護劑的新鮮培養基中。凍存前，必須縮短操作時間且確保芽孢并未萌發。針對非芽孢菌凍存，凍存前需采用特殊程序收集菌絲體。某些具硬菌絲體的真菌，需將含有菌絲體的瓊脂塊從培養基中切出，并將其置于含凍存保護劑的新鮮培養基中。硬菌絲體無法與瓊脂培養基很好粘附，生長于肉湯培養基中時，凍存前需將菌絲體團進行混合。

    凍存材料的活力和復蘇率由凍存前后的培養和生長狀態決定。活力是衡量培養物生長和繁殖的一項指標。例如原生生物材料等某些材料，需經過多次傳代才能保證其穩定性。復蘇細胞數量的估算有多種方法，包括連續稀釋，平板計數或直接細胞計數。通過對比凍存前和復蘇后細胞數量的差異，可說明細胞復蘇程度 或凍存過程是否成功。