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怎么處理細(xì)胞培養(yǎng)板里面的細(xì)胞總是聚集在周邊的問題
細(xì)胞培養(yǎng)板根據(jù)底部形狀的不同可分為平底和圓底(U型和V 細(xì)胞培養(yǎng)板型)
平底的什么類型的細(xì)胞都可用﹐但當(dāng)細(xì)胞數(shù)目較少﹐如做克隆時(shí)﹐就用96孔平底板﹐另外﹐做MTT等實(shí)驗(yàn)時(shí)﹐無論貼壁 和懸浮細(xì)胞﹐一般均用平底板。至于U或V型板﹐一般在某些特殊要求時(shí)才使用。如在免疫學(xué)方面﹐當(dāng)做兩種不同淋巴細(xì)胞溷合培養(yǎng)時(shí)﹐需要二者相互接觸以刺激﹐ 因此﹐一般需要U型板﹐因細(xì)胞會(huì)由于重力的作用而聚集在一個(gè)很小的范圍內(nèi)。
圓底培養(yǎng)板主要用于同位素?fù)饺氲膶?shí)驗(yàn)，需要用細(xì)胞收集儀收集細(xì)胞的培養(yǎng)。
細(xì)胞接種培養(yǎng)板，細(xì)胞總是聚集在周邊部分，該如何處理啊？
先看下自己的細(xì)胞是如何混勻的？是滴管吹打還是振蕩培養(yǎng)板？如果是后者，而且是轉(zhuǎn)圈搖勻的話，很有可能由于離心力的作用使細(xì)胞甩到周邊部分，導(dǎo)致細(xì)胞中間少，四周多！
這里提供一個(gè)好辦法：在培養(yǎng)種板之前，把培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱里進(jìn)行幾個(gè)小時(shí)的飽和后再取出，種入細(xì)胞時(shí)力量要輕，可采取用滴頭在培養(yǎng)板孔的側(cè)面慢慢加入讓細(xì)胞懸液流入板孔中，培養(yǎng)的細(xì)胞基本是均勻生長。記住千萬不要用振蕩器振蕩，否則你的細(xì)胞就會(huì)想你說得那樣聚積在一起。
培養(yǎng)板孔直徑愈小，這個(gè)現(xiàn)象越明顯，24、96孔板這種現(xiàn)象不可避免，因?yàn)橐后w的附壁使得孔內(nèi)培養(yǎng)液不是成一個(gè)液平面，而是周邊高，就像凹鏡一樣，而使用這兩種孔板由于需要加干預(yù)等原因而不能加足量培養(yǎng)液，使得細(xì)胞隨培養(yǎng)液一起出現(xiàn)“邊集”現(xiàn)象，如果為了使孔中央也有均勻細(xì)胞而增加接種細(xì)胞數(shù)量的話，這要看你需要觀察何種指標(biāo)，如果是MTT ，免疫組化的話會(huì)因?yàn)榧?xì)胞成層而影響結(jié)果。
消化細(xì)胞時(shí)要注意吹打均勻，避免細(xì)胞成團(tuán)，而且孔內(nèi)培養(yǎng)液量要足夠，一般接種時(shí)加足量培養(yǎng)液，加干預(yù)時(shí)換一次液，干預(yù)液加培養(yǎng)液量等于接種時(shí)培養(yǎng)液量，這樣的話“邊集”現(xiàn)象會(huì)有所改觀，不妨一試。
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