在傳統(tǒng)報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)中，大多數(shù)使用的是螢火蟲(chóng)螢光素酶和海腎螢光素酶閃光型(flash type)檢測(cè)體系，但其發(fā)光信號(hào)的半衰期較短，穩(wěn)定性不佳等缺點(diǎn)，會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果和使用造成影響。針對(duì)傳統(tǒng)閃光型螢光素的不足，翌圣生物經(jīng)過(guò)潛心研究開(kāi)發(fā)出新一代的操作更便捷、半衰期更長(zhǎng)、穩(wěn)定性更好的輝光型(glow type)螢光素酶檢測(cè)系統(tǒng)，適用于如哺乳動(dòng)物細(xì)胞、原生質(zhì)體等樣本。

螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)檢測(cè)原理示意圖

以下是閃光型(flash type)與輝光型(glow type)對(duì)比情況：

閃光型(flash type)操作流程，較為繁瑣

輝光型(glow type)操作流程，一步完成檢測(cè)

Yeasen檢測(cè)系統(tǒng)螢光強(qiáng)度和穩(wěn)定性與P品牌相當(dāng)

Yeasen檢測(cè)系統(tǒng)和螢光素酶相互作用，螢光素發(fā)光淬滅效果與P品牌相當(dāng)

A：室溫條件（20-22℃）。反應(yīng)組分如細(xì)胞裂解產(chǎn)物，底物工作液等都需要調(diào)整到室溫，因?yàn)閮煞N螢光素酶的反應(yīng)速率是受溫度影響，為了保證實(shí)驗(yàn)一致性，推薦反應(yīng)室溫調(diào)至室溫。

A：1）螢火蟲(chóng)螢光素酶建議選取pGL-3或pGL-4或者自己構(gòu)建的載體。

2）海腎螢光素酶建議選取pRL-TK或pGL-4載體或者自己構(gòu)建相應(yīng)的載體。建議優(yōu)先選用中等強(qiáng)度的啟動(dòng)子（如TK），而不使用強(qiáng)啟動(dòng)子（如SV40、CMV），以免影響主報(bào)告基因的表達(dá)，或進(jìn)行實(shí)驗(yàn)摸索選擇合適的載體。

A：推薦對(duì)照組螢火蟲(chóng)和海腎螢光素酶的讀值接近，或者海腎螢光素酶比螢火蟲(chóng)螢光素酶的讀值略高。實(shí)際實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，由于螢火蟲(chóng)螢光素酶質(zhì)粒和海腎螢光素酶的質(zhì)粒抽提的質(zhì)量不一致，待檢測(cè)目的調(diào)控元件的調(diào)控能力的不同等原因，我們推薦預(yù)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化螢火蟲(chóng)螢光素酶質(zhì)粒和海腎螢光素酶質(zhì)粒的共轉(zhuǎn)染量。

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