Biozellen®3D類器官培養(yǎng)基質(zhì)膠在細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)的應(yīng)用

來源：深圳市安培生物科技有限公司 2022年02月21日 23:48

細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備程序

A、試劑準(zhǔn)備:

1、C 緩沖溶液 (0.5 X) 制備 : 使用 37 ℃水浴回溫的無血清細(xì)胞培養(yǎng)液 (例如: 無血清 DMEM 等，用于稀釋 A 膠) 稀釋 C 緩沖溶液 (10 X) (貨號: B-P-00003-C)至 C 緩沖溶液 (0.5 X), 即體積稀釋 20 倍。使用前放置 37 度水浴槽。 (例如:1 mL C 緩沖溶液 (10 X) + 19 ml 無血清 DMEM; 如未使用完畢，可保存于 4 ℃ 冰箱, 保存一周)

2、A 膠 (1X) 制備 : 將 A 膠 (2X) (貨號: B-P-00003-A) 置于 37 ℃水浴槽回溫 10 分鐘，確認(rèn)*溶解。再將 37 ℃水浴回溫的無血清細(xì)胞培養(yǎng)液取 0.5 mL，加至 37 ℃已溶解的 0.5 mL A 膠 (2X)，配置成 1 mL的 A 膠 (1X)。使用前置于 37 度，可降低 A 膠黏度。(單次使用，勿重復(fù)冷凍解凍 A 膠 (1X) )

B、細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)步驟

1、準(zhǔn)備適用 24 孔板的 Transwell 裝置(例如:康寧 Transwell insert, 8 μm PET membrane)。

2、用 37 ℃已回溫的 C 緩沖溶液 (0.5 X)將 A 膠 (1X) 原液體積稀釋 5-20 倍，建議一開始可選用 15 倍。

(根據(jù)細(xì)胞種類做稀釋比例對比實(shí)驗(yàn)，找出適合自己實(shí)驗(yàn)體系的稀釋倍數(shù)，稀釋倍數(shù)越高，膠體越軟，越容易穿透)

3、根據(jù) Transwell 上室底部面積加入步驟 2 的 0.1 mL 稀釋后的 A 膠稀釋液到 Transwell 上室中。

4、將步驟 4 在 4 ℃ 冰箱孵育 2-3 小時(shí)。

5、在 Transwell 上室中加入 0.1 mL 無血清的細(xì)胞懸液，使細(xì)胞最終濃度約 7.5 x 104 cells/well.。

6、在 Transwell 下室中加入 0.8 mL 含 10 %血清的細(xì)胞培養(yǎng)液做為 chemoattractant，吸引細(xì)胞進(jìn)行遷移及分泌基質(zhì)蛋白酶 (MMP) 侵襲。 (對照組為 Transwell 下室中加入含 0.8ml 無血清的細(xì)胞培養(yǎng)液)。

7、將細(xì)胞培養(yǎng)板在 37 ℃, 5 % CO2 培養(yǎng)箱孵育 24-48 小時(shí)。

8、移除培養(yǎng)液，以 PBS 清洗 2 次。

9、用棉簽輕輕擦掉上層未遷移的細(xì)胞。

10、加入 1 ml 100 % 甲醇室溫固定 30 分鐘,再以 PBS 清洗 2 次。

11、加入 1 ml 0.1 % 結(jié)晶紫染液 ( 0.1 % (g/ml) PBS 結(jié)晶紫) 室溫染色 20 分鐘，再以 PBS 清洗 2 次。

12、將 Transwell 移至載玻片上，在顯微鏡下隨機(jī) 6-9 個(gè)視野觀察計(jì)算遷移的細(xì)胞數(shù)。

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安培生物堅(jiān)持為生命科學(xué)研究、活體動(dòng)物轉(zhuǎn)染、大規(guī)模生物生產(chǎn)、基因和細(xì)胞治療領(lǐng)域客戶，提供*細(xì)胞體內(nèi)可代謝的核酸轉(zhuǎn)染試劑；inviCELL™Platelet lysate無動(dòng)物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細(xì)胞擴(kuò)增和生產(chǎn)，包括培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞和多種免疫細(xì)胞系等，為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無血清細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務(wù)；提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細(xì)胞培養(yǎng)可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品；提供內(nèi)毒素≦ 1.0 EU/mL、對細(xì)胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專注為生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)，努力發(fā)展為基因治療、細(xì)胞治療的生物科技企業(yè)。

深圳市安培生物科技有限公司是美國Biozellen公司的中國代理商。Biozellen®3D培養(yǎng)基質(zhì)膠經(jīng)驗(yàn)證可*替代BD/康寧的基質(zhì)膠，來源為植物源且氨基酸序列人源化，無人畜共患病的病原菌或毒素污染，提供完整售后服務(wù)和技術(shù)支持。

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