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Biozellen®3D細(xì)胞培養(yǎng)基質(zhì)膠在3D細(xì)胞球體培養(yǎng)試驗(yàn)

來源:深圳市安培生物科技有限公司   2022年02月21日 23:57  
3D 細(xì)胞球體培養(yǎng)試驗(yàn)步驟:
A、試劑制備
1、A 基質(zhì)膠:將 A 基質(zhì)膠溶于 37℃水浴槽回溫 10 分鐘, 確認(rèn)*融解.
2、C 緩沖溶液(1X)制備:使用前將 10X C 緩沖溶液用冰的無(wú)細(xì)胞培養(yǎng)液(例如: 無(wú)血清 DMEM、opt-MEM)制備成 1X C 緩沖溶液。(不要用 PBS 稀釋 C 緩沖液) .
3、D 緩沖溶液(1X)制備: 使用前用冷的 1x PBS 稀釋 10X D 緩沖溶液至 1X D 緩沖溶液.
B、Biozellen®3D 細(xì)胞培養(yǎng)基質(zhì)膠的制備
全部步驟需要在無(wú)菌環(huán)境內(nèi)操作,操作步驟如下:
1、將 24 孔培養(yǎng)板放置于冰上預(yù)冷半小時(shí)。
2、細(xì)胞計(jì)數(shù)后取 2×105~2×107 細(xì)胞與 0.5 毫升 37℃ 細(xì)胞培養(yǎng)基均勻混合,并與 0.5 毫升 37℃ A 膠按照 1:1 等比例均勻混合,最終細(xì)胞密度 1*105~1*107cells/mL。
注:請(qǐng)選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)溶液與條件進(jìn)行試驗(yàn)。
3、取 20-40 微升步驟 2 的混合液滴于 步驟 1 預(yù)冷的培養(yǎng)板上,膠體將于 5 分鐘內(nèi)成膠。 注: 測(cè)試膠體是否成膠,可用微量吸管尖溫和的觸碰膠體表面進(jìn)行確認(rèn)。
4、待膠體成膠后,添加 1 毫升冰的 1X C 緩沖溶液,并蓋過步驟 3 的膠溶液,固定 15 分鐘。
5、待 15 分鐘固定后,小心的吸取 C 緩沖溶液并置換為適合此細(xì)胞生長(zhǎng)之培養(yǎng)基溶液。
6、將含有細(xì)胞的膠于 37°C 二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行 7~14 天的培養(yǎng),并觀察細(xì)胞球體的形成,按正常培養(yǎng)基更換頻率進(jìn)行更換操作。
C、溶膠與收集細(xì)胞球體準(zhǔn)備程序
1、小心的將培養(yǎng)基吸取移除,并用 1X PBS 進(jìn)行清洗。
2、小心的將 1X PBS 吸取移除,并添加 1 毫升冰的 D 緩沖溶液,蓋過膠滴于室溫反應(yīng) 5 分鐘。
3、溫和的用 1 毫升移液管吸取,直到膠滴*溶解。
4、將含有細(xì)胞球體的溶液吸入 1.5 毫升離心管,用 1000 rpm 的轉(zhuǎn)速離心 10 分鐘,移除上清液體并收集細(xì)胞球體做分析。
D、收集單顆細(xì)胞準(zhǔn)備程序
在分離單細(xì)胞前,先按上述溶膠與收集細(xì)胞球體準(zhǔn)備程序進(jìn)行操作
1、添加 trypsin-EDTA 并與收集的細(xì)胞球體于 37°C 混合反應(yīng)。
2、用 1 毫升移液管混合,直到細(xì)胞體*分解。
3、待細(xì)胞球體*分解,加入 3 倍體積的 1X PBS,并用 1000 轉(zhuǎn)的轉(zhuǎn)速進(jìn)行離心 10 分鐘,并移除上清液體收集沉淀的單細(xì)胞做分析。

 

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安培生物科技有限公司介紹:

安培生物堅(jiān)持為生命科學(xué)研究、活體動(dòng)物轉(zhuǎn)染、大規(guī)模生物生產(chǎn)、基因和細(xì)胞治療領(lǐng)域客戶,提供*細(xì)胞體內(nèi)可代謝的核酸轉(zhuǎn)染試劑;inviCELL™Platelet lysate無(wú)動(dòng)物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細(xì)胞擴(kuò)增和生產(chǎn),包括培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞和多種免疫細(xì)胞系等,為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務(wù);提供以植物生物為平臺(tái)基因序列全人源化、*的細(xì)胞培養(yǎng)可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品;提供內(nèi)毒素≦ 1.0 EU/mL、對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專注為生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù),努力發(fā)展為基因治療、細(xì)胞治療的生物科技企業(yè)。

 

深圳市安培生物科技有限公司是美國(guó)Biozellen公司的中國(guó)代理商。Biozellen®3D培養(yǎng)基質(zhì)膠經(jīng)驗(yàn)證可*替代BD/康寧的基質(zhì)膠,來源為植物源且氨基酸序列人源化,無(wú)人畜共患病的病原菌或毒素污染,提供完整售后服務(wù)和技術(shù)支持。

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