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原理
淋巴細(xì)胞與用溴花二氨基異硫氫化物（簡稱AET）處理的綿羊紅細(xì)胞（SRBC）混合后，其中全部T淋巴細(xì)胞均能吸附AET-SRBC，形成牢固穩(wěn)定而巨大的E-花環(huán)，較正常未處理的SRBC形成的E-花環(huán)百分比為高，而且形成快速，不易脫落，重復(fù)性好。再經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離時，AET-E花環(huán)易沉于管底，而未形成E-花環(huán)的T淋巴細(xì)胞，用低滲液解花環(huán)周圍的 AET-SRBC，便可獲得純T淋巴細(xì)胞，而B淋巴細(xì)胞可直接取自分層液的界面。
材料與儀器
新鮮豚鼠血
Hanks液 小牛血清 199培養(yǎng)液 生理鹽水 氯化鈉溶液
離心管 離心機(jī)
步驟
1. AET-RRBC制備
（1）AET溶液的制備
（2） AET處理RRBC
（3）1%AET-RRBC的配制：
2. 從新鮮豚鼠血液分離單個核細(xì)胞，操作見后試驗。
3. AET—E花環(huán)試驗：
4. T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞的分離
注意事項
1. 分離B細(xì)胞過程較長，為了避免B細(xì)胞自然死亡，在最后沖洗B細(xì)胞時可以用1640,而且要加入5一10%的小牛血清。
2. 每次洗滌時，不要將試管底部液體吸干，即防止壓積的B細(xì)胞接觸空氣。
3. 使用抗B淋巴細(xì)胞血清與受檢細(xì)胞按NIH方法進(jìn)行微量B細(xì)胞毒試驗，使用倒置相差顯微鏡讀數(shù)。
常見問題
關(guān)于從小鼠脾臟中分離：
1.脾臟組織所含結(jié)締組織比較少，可以直接在篩網(wǎng)上研磨，無需剪碎，也不用顧慮血管。
2.ficoll中含多聚糖，所以許多人喜歡把它放4度存放，是否室溫對實驗影響不大脾臟分離淋巴細(xì)胞實驗比較簡單，所以用普通的淋巴細(xì)胞分離液就行。
3 .離心2000rpm×20min，這步很關(guān)鍵，還有就是加細(xì)胞懸液時一定要貼壁緩慢加入，不要破壞分界面，分離液與細(xì)胞懸液我常用1：2，還有就是所選用的離心管粗細(xì)也會影響分層。
4.中間的懸浮白色環(huán)狀細(xì)胞層即是所要的淋巴細(xì)胞層。
5.洗細(xì)胞主要是洗去分離液，所以不能省去。
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