HPV16-GFP假病毒說(shuō)明書(shū)

【產(chǎn)品名稱(chēng)】

通用名稱(chēng)：HPV假病毒 

【預(yù)期用途】

用于HPV抗血清或者單抗中和抗體滴度體外檢測(cè)。

【檢驗(yàn)原理】

中和抗體在體外與假病毒中和，使得假病毒喪失感染細(xì)胞的能力，進(jìn)入細(xì)胞的假病毒會(huì)表達(dá)EGFP等蛋白，通過(guò)Elispot讀板儀掃描并計(jì)數(shù)每孔熒光斑點(diǎn)數(shù)，通過(guò)與假病毒對(duì)照組熒光斑點(diǎn)數(shù)比較，計(jì)算其抑制百分比，通過(guò)計(jì)算公式可以計(jì)算出當(dāng)假病毒50%被抑制時(shí)抗體的稀釋倍數(shù)，來(lái)計(jì)算其ID₅₀,用ID₅₀來(lái)表示抗體對(duì)假病毒中和活性大小。

【主要組成成分】

HPV假病毒顆粒，L1和L2蛋白以及報(bào)告基因，自折疊成HPV假病毒顆粒

【儲(chǔ)存條件及有效期】

-80℃ 密封貯存。。

避免反復(fù)凍融。

生產(chǎn)日期及有效期詳見(jiàn)標(biāo)簽。

【樣本要求】HPV16-GFP假病毒說(shuō)明書(shū)

樣本為HPV假病毒，可在體內(nèi)復(fù)制一輪，操作時(shí)需在無(wú)菌條件下操作。

【檢驗(yàn)方法】

1 預(yù)先4-8小時(shí)鋪293FT細(xì)胞于96孔板，每孔細(xì)胞數(shù)為1.5×10⁴ ，置于37℃、 5% CO₂孵箱中培養(yǎng)。

2 加樣順序

2.1 40倍初始稀釋?zhuān)喝?/span>96孔U型板，于B4- B11孔中各加入152μl DMEM培養(yǎng)基，其余各孔中加入120μl DMEM培養(yǎng)基。于B4- B11孔中加入血清樣品8μl/孔，每樣品兩復(fù)孔。

2.2 10倍初始稀釋?zhuān)喝?/span>96孔U型板，于B4- B11孔中各加入128μl DMEM培養(yǎng)基，其余各孔中加入120μl DMEM培養(yǎng)基。于B4- B11孔中加入血清樣品32μl/孔，每樣品兩復(fù)孔。

加樣順序表HPV16-GFP假病毒說(shuō)明書(shū)

3樣品稀釋?zhuān)簩⒍嗟离妱?dòng)移液器調(diào)至40μl移液和100μl混勻程序，對(duì)B4- B11孔中液體輕柔的反復(fù)吹吸8次充分混勻，然后轉(zhuǎn)移40μl液體至對(duì)應(yīng)的C4- C11孔，輕柔的反復(fù)吹吸8次后轉(zhuǎn)移至D4-D11孔，以此類(lèi)推，從G4-G11孔中吸棄40μl液體。

5.2.4 用DMEM培養(yǎng)基將假病毒稀釋至200TCID₅₀，于第B3-G11孔，每孔加120μl。

5.2.5將稀釋板4℃ 放至1小時(shí)。

5.2.6 從稀釋板各孔中吸取100μl的假病毒血清混合物（或培養(yǎng)基）貼壁緩緩加入預(yù)先已鋪好細(xì)胞的培養(yǎng)板對(duì)應(yīng)孔中，輕拍培養(yǎng)板四周混勻。  

5.2.7 將細(xì)胞培養(yǎng)板置于37℃、5% CO₂的孵箱中培養(yǎng)60-96小時(shí)。

5.2.8 ELISPOT讀板儀進(jìn)行檢測(cè)，計(jì)算感染抑制率（%）=1-（樣本檢測(cè)值-細(xì)胞對(duì)照值）/（病毒對(duì)照值-細(xì)胞對(duì)照值）×100%。

5.2.9 計(jì)算ID₅₀。

【陽(yáng)性判斷值】

中和實(shí)驗(yàn)過(guò)程中需要設(shè)置陰性對(duì)照，陽(yáng)性對(duì)照，作為參照，來(lái)判斷實(shí)驗(yàn)是否成立，陰性對(duì)照ID50小于30，陽(yáng)性ID50大于30作為判斷值

【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

1. 外觀

外觀應(yīng)滿(mǎn)足如下要求：

1.1包裝完整，無(wú)破損；外觀應(yīng)整潔，文字符號(hào)標(biāo)識(shí)清晰；

【注意事項(xiàng)】

1. 本產(chǎn)品僅供中和抗體體外檢測(cè)。

2. 減少反復(fù)凍融

3. 流水或者4℃融化使用。

4. 無(wú)菌操作。

5. 本產(chǎn)品不能重復(fù)使用。

HPV16-GFP假病毒說(shuō)明書(shū)