確認(rèn)選用的培養(yǎng)菌體是否新鮮，如果菌體需要保存時(shí)，請(qǐng)于-80℃保存。

起始菌液量過(guò)多，導(dǎo)致菌液裂解不充分，部分DNA降解。

菌體本身富含DNA酶活性，加入Digestion solution后再加20uL0.5M EDTA溶液來(lái)抑制內(nèi)源性核酸酶

提取的基因組DNA中鹽分濃度過(guò)高，請(qǐng)嚴(yán)格按照說(shuō)明書操作。

提取的基因組DNA中含有乙醇。離心的速度和時(shí)間應(yīng)該嚴(yán)格遵循說(shuō)明書要求進(jìn)行。

4.堿裂解法提取的質(zhì)粒DNA進(jìn)行瓊脂糖電泳進(jìn)行鑒定時(shí)，看到的三條帶分別是什么？

堿法抽提得到質(zhì)粒樣品中不含線性DNA，得到的三條帶是以電泳速度的快慢排序的，分別是超螺旋、開環(huán)和復(fù)制中間體（即沒有復(fù)制*的兩個(gè)質(zhì)粒連在了一起）。如果你不小心在溶液II加入后過(guò)度振蕩，會(huì)有第四條帶，這條帶泳動(dòng)得較慢，遠(yuǎn)離這三條帶，是20-100kb的大腸桿菌基因組DNA的片斷。

5. 為什么用酚與氯仿抽提DNA時(shí)，還要加少量的異戊醇？

在抽提DNA時(shí)，為了混合均勻，必須劇烈振蕩容器數(shù)次，這時(shí)在混合液內(nèi)易產(chǎn)生氣泡，氣泡會(huì)阻止相互間的充分作用。加入異戊醇能降低分子表面張力，所以能減少抽提過(guò)程中的泡沫產(chǎn)生。一般采用氯仿與異戊醇為24：1之比。也可采用酚、氯仿與異戊醇之比為25：24：1（不必先配制，可在臨用前把一份酚加一份24：1的氯仿與異戊醇即成），同時(shí)異戊醇有助于分相，使離心后的上層水相，中層變性蛋白相以及下層有機(jī)溶劑相維持穩(wěn)定。

1.凍存細(xì)胞與新鮮細(xì)胞的RNA提取有區(qū)別嗎？具體該怎么操作？

2.RNA得率低

• 該組織或者細(xì)胞中RNA含量偏低：不同細(xì)胞和組織中RNA的豐度不同，如肝臟，胰腺，心臟等是高豐度組織(總RNA含量2-4μg/mg)，腦，胚胎，腎臟，肺，胸腺，卵巢等是中豐度組織(總RNA含量0.05-2μg/mg)，膀胱，骨，脂肪等是低豐度組織(總RNA含量<0.05μg/mg)。

  
  

• 組織起始量太少或者太多：樣品量過(guò)少，則細(xì)胞組織中RNA含量較低；樣品量過(guò)多則可能超過(guò)裂解液的裂解能力，裂解將不*，從而導(dǎo)致RNA得率低。