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細胞凍存&細胞復蘇

來源:蘇州千舍生物科技有限公司   2022年04月08日 11:51  
03細胞凍存:


試劑:凍存液,PBS,胰酶,含血清的培養基;
流程:要凍存,先配置凍存液,凍存液包含了:DMSO:防止在低溫(零度以下至-196℃)保存細胞時,細胞內液會形成冰晶,滲透壓會發生改變,細胞結構會出現紊亂,會導致細胞出現損傷。凍存液制備時,一般需與血清一起配置:因為兩者互融時,會散發熱量,所以凍存液需提前制備。
因為細胞太多了,需要凍存,所以要先看一看,吸一吸,洗一洗,分一分,中和一下,吹打制成細胞懸液,離心,吸掉上清液,加入凍存液,輕輕吹吸均勻,每管等量1ml裝入凍存管,4℃20min,-20℃30min,-80℃過夜,最后放入液氮罐。
04細胞復蘇:
試劑:含血清的培養基;
流程:從液氮中取出凍存管,迅速(小于3min)置于37℃水浴鍋中,解凍時,邊晃動邊觀察,當看到只有一小塊冰存在時,即可從水浴鍋中取出,打開凍存管,迅速將細胞懸液吸到離心管中,輕輕混勻,1000r/min,離心五分鐘,吸掉上清液,沉淀中加入適量培養液,放入孵箱中,培養。還有就是:復蘇的細胞,需要在24小時后,換一次培養液。



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