產品介紹：

PureCube Rho1D4 Agarose是針對Rho1D4標簽膜蛋白的親和層析產品，Rho1D4是一種含有9個氨基酸的長鏈親和標記物(TETSQVAPA)，可用于高特異性親和蛋白純化。庫柏生物的PureCube Rho1D4瓊脂糖純化樹脂是為FPLC蛋白的純化測定而制造的。具有Rho1D4標簽的膜蛋白可以通過PureCube Rho1D4 Agarose，利用Rho-tag高特異性來純化，它在蛋白質產量和純度方面甚至勝過更常用的Flag-Tag標記。本產品由通過Rho1D4抗體進行功能化40 µm瓊脂糖微球組成。德國Cube Biotech研發團隊擁有逾40年經驗在膜蛋白的表達、純化和結晶等研究經驗，為您提供專用于膜蛋白純化的Rho1D4系列高質量PureCube Rho1D4瓊脂糖填料、磁珠和預裝柱，以及具有較高流速XL瓊脂糖同系列產品。

產品優勢：

1）德國制造，歐美膜蛋白純化產品供應商

2）膜蛋白純化的理想解決方案，可以獲得純凈且活性的膜蛋白；
3）結合能力可高達3-4mg/mL；
4）高度特異性純化帶有標簽的重組膜蛋白；
5）可重復再生使用；
6）良好的流量分布和最小空隙體積；
7）兼容常用的色譜儀器；
8）配合Nanodisc使用，是目前非常有效的膜蛋白提取解決方案，數家科研院校正在使用；
9）高性價比的膜蛋白純化產品！

 
產品詳解：
對膜蛋白提取有高特異性和高產量
每個批次的PureCube凝膠均是按照嚴格的質量標準體系生產并嚴格檢驗，以確保每一批分裝的產品都有高的蛋白結合能力。通過與特異性抗原表位相互作用，輔以優化過的純化操作步驟，能使目標蛋白在洗脫組分中有高產出量。圖1是對CXC趨化因子受體4(CXCR4)的純化溶于Fos-Choline®-14的帶標簽蛋白通過大腸桿菌表達，再經由含PureCube Rho1D4瓊脂糖的層析柱純化。用Rho1D4多肽作為洗脫液，4次洗脫組分每毫升共收集到0.8mg、1.0mg、0.85mg和0.6mg目標蛋白。蛋白印跡結果說明CXCR4大約是65 kDa和35 kDa。這些條帶是39.7 kDa膜蛋白的二聚體和單體。單體、二聚體的分離以及去除洗脫肽段，可以通過排阻層析的方法實現。

圖1：用PureCube Rho1D4瓊脂糖純化CXCR4。
大腸桿菌裂解液（TL）溶解在Fos-Choline®-14中，溶解的組分（SF）與裝有Rho1D4抗體的免疫親和層析柱相結合。平衡組分中沒有測得損失目標蛋白，經分光光度計測定，CXCR4在洗脫組分（E1-E4）中得濃度范圍在0.6-1.0mg/mL。

           
表1：有文獻報道的使用Rho1D4系統純化膜蛋白的純度和產率。

盡管很多用Rho1D4系統純化的膜蛋白均為G蛋白偶聯受體家族，該系統也可以有助于辨別其他如轉運體之類的膜蛋白。 IAC：免疫親和層析；SEC：排阻層析。
在20世紀80年代發現Rho1D4表位和配對抗體，當時通過將抗體偶聯到Sepharose®上來純化在猴腎細胞中表達的牛視紫紅質。自此，Rho1D4系統（標簽，偶聯抗體的親和基質，洗脫肽）開始用于少量膜蛋白的純化，包括G蛋白偶聯受體（GPCR），ATP結合轉運體，溶質反向轉運體和一個四次跨膜蛋白。

圖2：假設有3個跨膜域的膜蛋白。Rho1D4標簽加到膜蛋白C端，它的序列是T-E-T-S-Q-V-A-P-A

通過轉基因修飾在目標膜蛋白的C端（或N端）加上Rho1D4標簽（如圖1）。一旦配有該序列，即可用裝載有Rho1D4抗體的親和基質捕獲目標蛋白，并隨后通過添加過量Rho1D4多肽，產生競爭性結合基質表面抗體來洗脫目標蛋白，用此方法洗脫比改變pH值等方式更加溫和。
Rho1D4系統的一大優勢是抗體與表位相互作用特異性非常高。而其另一大優勢是洗脫目的蛋白收率相當高。利用Rho1D4純化的目標蛋白可用于功能性研究，如：配體結合的特性，蛋白與蛋白間的相互作用。
*純度是從低濃度經一步Rho1D4 IAC在反應溶液中得出的；產率是在洗脫成分濃縮并過SEC柱后計算。

 
技術參數：

相關產品:

1. 所有PureCube系列瓊脂糖產品均提供用于自動液相色譜系統（如：FPLC）的預裝柱（提供1mL）；

2. 用于稀釋樣品或用于pull-down實驗，我們推薦使用PureCube Rho1D4 Magbeads磁珠；

3. Rho1D4抗體：這種抗體作為分離物質來生產PureCube的Rho1D4瓊脂糖。也可以在Western Blot實驗或者ELISA實驗中檢測rho-tagged蛋白；

4. Rho1D4多肽：在洗脫緩沖液中，Rho1D4多肽競爭結合到親和層析凝膠上然后釋放標簽蛋白,相對于改變洗脫液的pH值來說提供了更溫和的洗脫環境。Cube Biotech 提供了一系列的Rho1D4肽段，這些肽段已經被PureCube Rho1D4瓊脂糖驗證；

5. 配合Nanodisc產品使用，是有效的膜蛋白提取解決方案。

6. Rho1D4多肽可以單獨購買，也可以購買PureCube Rho1D4試劑盒套裝。詳情請參見訂貨信息以及公司。

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訂購信息:

References:

1. Mattle D. et al.(2015). Mammalian Expression, Purification, and Crystallization of Rhodopsin Variants. In: Jastrzebska B. (eds) Rhodopsin. Methods in Molecular Biology, vol 1271. Humana Press, New York, NY
 

2. Brosig, A. et al (2019). The Axonal Membrane Protein PRG2 Inhibits PTEN and Directs Growth to Branches. Cell Reports. 29. 2028-2040.e8. 10.1016/j.celrep.2019.10.039.
 

3. Ahmed, Chulbul M., et al. "SRD005825 Acts as a Pharmacologic Chaperone of Opsin and Promotes Survival of Photoreceptors in an Animal Model of Autosomal Dominant Retinitis Pigmentosa." Translational Vision Science & Technology 8.6 (2019): 30-30.
 

4. Liu, Da-Wei et al. (2018). The Cone Opsin Repertoire of Osteoglossomorph Fishes: Gene Loss in Mormyrid Electric Fish and a Long Wavelength-Sensitive Cone Opsin That Survived 3R. Molecular Biology and Evolution. 10.1093/molbev/msy241.
 

5. Kotov, Vadim et al. (2019). High-throughput stability screening for detergent-solubilized membrane proteins. Scientific Reports. 9. 10.1038/s41598-019-46686-8.

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目前，成都正民德思生物科技有限公司作為德國蛋白純化產品生產商/服務商Cube Biotech生物科技公司中國總代理、西班牙生物磁性分離設備制造商SEPMAG中國總代理、西班牙免疫診斷試劑研發服務商Pragmatic Diagnostics公司的中國戰略合作方，在成都成立Cube Biotech、SEPMAG和Pragmatic Diagnostics的中國總部辦事處，全權負責在中國地區的營銷事務、銷售及售后服務等所有工作。