摘要：本文使用安捷倫 1290 Infinity 二維液相系統 (2D-LC) 開發了一個用于分析復雜中藥成分的全二維液相方法，在較短的分析時間內大幅提高了方法的峰容量，為復雜樣品體系的分析提供了新的解決方案和思路。此方法使用安捷倫 1290 Infinity 2D-LC 系統及相應軟件功能進行開發和編輯，方法使用簡便，結合安捷倫 Zorbax 及 Poroshell 系列色譜柱，分析快速，結果重現，能夠大幅提高中藥等復雜樣品的分離效率，可以進行更加快速準確的定性鑒別分析。

前言中藥化學成分分析是中藥藥效物質闡明及質量控制的關鍵問題之一，液相色譜分析(HPLC) 是進行此類定性定量工作的主要手段。由于中藥化學成分的復雜性，中藥成分分析一直存在著分離難度大、分析時間長等問題，近十年來發展起來的超高效液相色譜(UHPLC) 以及相應的液質聯用技術極大提升了對此類復雜樣品的分離能力及速度。但是隨著此類研究的不斷深入，對于中藥復方體系的綜合研究，相關的代謝療效研究等都對儀器分析方法的分離效率提出了更高的要求，即使是 UHPLC 方法也難以在較短時間內提供分離此類復雜樣品的足夠峰容量。

目前，在使用一根色譜柱的前提下增加峰容量的主要兩個手段有兩種：增加色譜柱長度、降低色譜柱填料粒徑，這兩種手段對峰容量的提升比較有限，而且都會顯著增加方法運行時產生的壓力，通過增加柱長的方法還會增加分析時間，對整體分析的效率提升不大。隨著儀器技術的發展，全二維液相色譜 (Comprehensive2D-LC) 技術成為了在短時間內獲得*峰容量的手段，為這類復雜樣品的分析提供了更高效的解決方案。本文使用了安捷倫全新的 1290 Infinity 二維液相 (2D-LC) 系統成功的對一個中藥樣品進行了全二維液相色譜分析，該中藥是一個由三味藥材組成的復方，經水解提取后制成中藥注射液，成分組成復雜，即使使用較長的 UHPLC 色譜柱進行長時間分析也難以將樣品中的組分進行良好分離，在本文開發的全二維方法中，利用了不同固定相及流動相選擇性的差異，在短時間內極大提高了分析方法的峰容量，獲得了更多的樣品信息，此方法分析迅速，重現性良好，為復雜中藥樣品的分析提供了新的思路和解決方案。

實驗儀器及試劑：儀器：安捷倫 1290 2DLC 系統，具體配置如下安捷倫 1260 Infinity 二元泵（第一維）安捷倫 1290 Infinity 二元泵（第二維）安捷倫 1290 Infinity 自動進樣器安捷倫 1290 Infinity 柱溫箱安捷倫 1290 Infinity 二極管陣列檢測器（兩臺）安捷倫 1290 Infinity Flex Cube 多功能模塊安捷倫 1200 Infinity 雙 2 位/4 通閥安捷倫 6224 飛行時間質譜安捷倫 ChemStation 軟件（配置 2DLC 功能插件）安捷倫 MassHunter 軟件LC×LC 二維色譜數據處理軟件（HRMS 版，GCimage Inc.）試劑：實驗用超純水由 Milli-Q（Millipore Inc.）純水機制備；甲醇，乙腈均為 HPLC 級，采購于迪馬公司；乙酸銨，乙酸，甲酸均為 HPLC級，采購于百靈威公司。

實驗結果圖 2 是使用上述方法對樣品進行 2D-LC 分析并使用 LC×LC（HRMS 版本 GCimage）軟件得到的等高散點數據圖（由 DAD 檢測器 254 nm 數據處理得到），圖中每個數據點代表一個二維分析得到的色譜峰，該點的橫縱坐標分別代表其在第一維和第二維分析上的保留時間，第一維為標準分析方法，橫坐標時間單位為分鐘 (min)，第二維為超快速梯度分析，縱坐標時間單位為秒 (s)。從圖中可以看出數據點隨機分散于圖中較大的扇形區域內，證明兩維梯度條件均能讓樣品在各自維度上得到盡可能好的分離，具有較好的正交性。對相同樣品進行了 5 次重復分析以考察方法的重現性，以樣品中強度較高的 9 個峰（圖 3）為考察指標分別對第一維和第二維保留時間（基于 DAD 數據結果）進行了計算，結果良好（表 3），證明此方法可以用于鑒別不同批次或工藝產品間組份組成的差異。