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反相色譜柱為色譜柱提供方便、經濟和有效的保護，延長了色譜柱的壽命，分析結果的重現性。隨著使用時間的增加，高效液相色譜柱分離效能下降，柱壓增高，其原因主要是由于色譜柱進口段的少量填料被污染引起的，而色譜柱整個柱床并未被破壞，使用保護柱，相當于在色譜柱前增加了一段額外的填料，起到了保護整個色譜柱的作用。
反相色譜柱特點：
采用高度可控的單分子層形成和封尾技術；
高的柱間重現性；
高的選擇性和分離效率；
適合分離酸性、中性和堿性化合物，以及許多藥物和多肽等。
反相色譜柱在使用緩沖液的過程中還要注意以下幾點：
1.避免使用鹽酸鹽，鹽酸鹽對鋼質有腐蝕作用；
2.緩沖液要現配現用，往往緩沖液是良好的菌類培養液，隔天或放置長時間實驗時會發生很多怪現象；
3.使用緩沖液要及時掌握pH范圍，做到胸中有數；
4.清洗液路和柱子時，有溫控可加熱到30攝氏度易于沖洗；
5.長時間用緩沖溶液要注意觀察接頭處有無析出，若有白色鹽類析出，定期用10%硝酸沖洗液路可以避免液路的堵塞；
6.反相色譜柱選擇緩沖液要用合適的試劑，避免不純的鹽類造成不必要的麻煩；
過渡流動相是指有機相和水相的組成與分析流動相相同，但是不含緩沖鹽的溶液。
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