北京科瑞美公司的骨切片由牛股骨的皮質(zhì)部分制成，*適合96孔板，直徑6mm，大概200μm厚。采用傳統(tǒng)染色法和培養(yǎng)基ELISA（CrossLaps）骨破壞重吸收的體外精確檢測。

 骨是一種很有活力的組織，在人的一生中都在不斷地重建?，F(xiàn)已證實，在骨中存在一些特殊物質(zhì)，能夠影響到破骨細(xì)胞的活性。因此在北歐生物科技公司，我們使用高質(zhì)骨而不是牙質(zhì)應(yīng)用于研究?，F(xiàn)在將向我們的客戶提供此類服務(wù)。

 每批骨切片通過重吸收檢測法來測試其質(zhì)量。在該檢測中，由骨切片上產(chǎn)生凹點證明破骨能力。隨后用培養(yǎng)基酶免吸附試劑盒Crosslaps檢測上清液。只有當(dāng)兩項測試都呈陽性時，該骨切片才能用于進一步的重吸收檢測。

 破骨細(xì)胞產(chǎn)生凹點的活性通過人破骨重吸收方法檢測。對破骨重吸收的定量分析可以采用傳統(tǒng)的對凹點染色方法，亦可使用培養(yǎng)基酶免吸附檢測法Crosslaps，

 由于破骨細(xì)胞實驗往往需要較大量的蛋白質(zhì)，而從牛骨切片中提取的蛋白質(zhì)用于96孔板，北歐生物科技公司開發(fā)了能夠*適用于6，12，24，48孔板的骨皮質(zhì)切片。

 將人破骨細(xì)胞分散覆蓋于牛骨皮質(zhì)片上，然后加入不同濃度的抗重吸收劑（A: 90 μM, B: 30 μM, C: 10 μM, D: 0 μM）。第6天取等量細(xì)胞培養(yǎng)上清液用于檢測膠原c端交聯(lián)肽（ctx）的量（培養(yǎng)基ELISA-CrossLaps）,從骨片上轉(zhuǎn)移破骨細(xì)胞并且用阻凝蛋白蘇木精染色，形成可見的凹點。

 我們推薦在轉(zhuǎn)移至96孔板之前，先將骨切片置于含培養(yǎng)基的10%血清中清洗三次。

 重吸收實驗一般持續(xù)72小時（見圖2）。然而在加入試劑到破骨細(xì)胞培養(yǎng)液中16或24小時后，就可觀察到細(xì)微的變化了，甚至8小時后即可用相應(yīng)方法觀察到。

 與凹點染色和劃線不同，培養(yǎng)基酶免吸附法Crosslaps不要求破骨細(xì)胞培養(yǎng)的終止。因此，可以從相同的股切片中獲得幾個樣品，從而使互換性檢測特定物質(zhì)影響下的破骨細(xì)胞活性成為可能。材料的處置與常見細(xì)胞培養(yǎng)物的處置相同。

【參考文獻】

1. HENRIKSEN ET AL. AM J PATHOL 164:1537-1545 (2004).

2. HOLLBERG ET AL. EXP CELL RES 279:227-238 (2002).

3. IVASKA ET AL. J BIOL CHEM 30;279(18):18361-9 (2004).

4. KARSDAL ET AL. AM J PATHOL 166:467-476 (2005).

5. SCHALLER ET AL. J BONE MINER RES 19:1144-1153 (2004)

6. STROUP ET AL. J BONE MINER RES 16:1739-1746 (2001).