1. 樣品處理（樣本處理區）

1.1 樣本前處理

取動物組織及其制品、食品或飼料約1g，手術剪剪碎混勻后取0.5g于研磨器中研磨，加入1.5mL生理鹽水后 繼續研磨，待勻漿后轉至 1.5mL滅菌離心管中，8000rpm離心2min，取上清液100μL于1.5mL滅菌離心管中。

1.2 核酸提取

推薦采用廣州維伯鑫生物科技股份有限公司生產的核酸提取或純化試劑（磁珠法或離心柱法）進行核酸提取，請按照試劑說明書進行操作。

2. 試劑配制（試劑準備區）

根據待檢測樣本總數，設所需要的 PCR反應管管數為 N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照；樣品每滿

10 份，多配制1 份)，每測試反應體系配制如下表：

將混合好的測試反應液分裝到 PCR反應管中，21uL/管。

3. 加樣（樣本處理區）

將步驟1 提取的核酸、陽性質控品、陰性質控品各取4μL，分別加入相應的反應管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。

4. PCR擴增（核酸擴增區）

4.1 將待檢測反應管置于熒光定量 PCR儀反應槽內；

4.2 設置好通道、樣品信息，反應體系設置為25μL；

熒光通道選擇： 檢測通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，ABI系列儀器請勿選擇ROX參比熒光，選擇 None即可。

【注意事項】

1.所有操作嚴格按照說明書進行；

2.試劑盒內各種組分使用前應自然融化，*混勻并短暫離心；

3.反應液應避光保存；

4.反應中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊；

5.使用一次性吸頭、一次性手套和各區專用工作服；

6.樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區進行，以免交叉污染；

7.實驗完畢后用10%次氯酸或75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器；

8.試劑盒里所有物品應視為污染物對待，并按照《微生物生物醫學實驗室生物安全通則》進行處理。