細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中的小細(xì)節(jié)

細(xì)胞實(shí)驗(yàn)是眾多科研項(xiàng)目的基礎(chǔ)，而細(xì)胞培養(yǎng)作為細(xì)胞實(shí)驗(yàn)最基礎(chǔ)的技術(shù)之一，更是滲透到了生物學(xué)研究的方方面面。

打好根基，上層建筑才能穩(wěn)固。細(xì)胞培養(yǎng)中血清使用方法的一些小細(xì)節(jié)，往往能夠影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的好壞，甚至是成敗。

今天我們匯總了一些錯(cuò)誤案例，拿給給大家敲敲警鐘，這些錯(cuò)誤，可千萬(wàn)別再犯！

Vol.1/ 血清直接4℃解凍

4℃過(guò)夜解凍 ×

三步法解凍 √

如何解凍血清，也是個(gè)老生常談的話題了。很多小伙伴還是習(xí)慣將血清從-20℃冰箱中拿出來(lái)后，直接丟進(jìn)4℃冰箱過(guò)夜，甚至是直接放在操作間，室溫環(huán)境下解凍，第二天一早直接開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。

這樣做都會(huì)導(dǎo)致血清出現(xiàn)融化不均勻的情況，使血清產(chǎn)生大量沉淀，影響血清品質(zhì)。

一旦產(chǎn)生大量沉淀，不少小伙伴就會(huì)離心或者過(guò)濾取出絮狀物，讓本來(lái)營(yíng)養(yǎng)豐富的血清，變得“寡淡”，細(xì)胞缺少相關(guān)蛋白、因子，自然更容易“營(yíng)養(yǎng)不良”，細(xì)胞狀態(tài)不好，實(shí)驗(yàn)結(jié)果也可想而知。

因此，強(qiáng)烈推薦大家使用三步法溶解。

這樣解凍的血清質(zhì)地澄清且均勻，不易產(chǎn)生大量沉淀。保證血清品質(zhì)，讓細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)充分，做起實(shí)驗(yàn)來(lái)更得心應(yīng)手。

Vol.2/ 一勞永逸法配血清

配超多培養(yǎng)基慢慢用×××

現(xiàn)用現(xiàn)配 √√√

為了省事，會(huì)解凍一大桶血清，然后配制成*培養(yǎng)基，放在冰箱里慢慢用。這其實(shí)是非常不好的習(xí)慣。

*培養(yǎng)基中的成分，例如：L-谷氨酰胺、抗生素，在室溫甚至是4℃冰箱中，都是比較容易分解的，血清也容易產(chǎn)生沉淀。

因此，如果配制好的培養(yǎng)基，長(zhǎng)期儲(chǔ)存在4℃冰箱中，極易變質(zhì)、失活，對(duì)于細(xì)胞來(lái)說(shuō)，“補(bǔ)品”秒變“毒yao”，所以我們建議，*培養(yǎng)基在4℃冰箱中存放不要超過(guò)7天。

Vol.3/ 血清一定要熱滅活

血清一定要熱滅活 ×××

根據(jù)情況決定 √√√

對(duì)于正規(guī)的胎牛血清而言，是不需要熱滅活的。

熱滅活的目的是消除補(bǔ)體對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響，正規(guī)胎牛血清采血時(shí)間是5-8月齡的胎牛，此時(shí)牛胚胎還未形成完整的補(bǔ)體系統(tǒng)，因此熱滅活就顯得多此一舉了。

不僅如此，熱滅活后的血清，更容易產(chǎn)生沉淀，影響血清品質(zhì)，導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢。沉淀物還容易擾亂視野，造成細(xì)胞被污染了的假象。實(shí)驗(yàn)者“敵我不分”，細(xì)胞背起了“污染”的“大鍋”。

所以，如果不是從事免疫學(xué)、ES細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞相關(guān)研究時(shí)，且使用的血清非胎牛血清，大可不必進(jìn)行熱滅活！