何為細胞老化？

1882年，德國生物學家Weismann曾大膽預測“在細胞水平存在老化現象”。他推測：機體的壽命限制受控于體細胞的分裂能力；在遺傳進化中，不同物種的體細胞獲得了不同分裂的潛能，從而決定了不同物種的壽命長短。

20世紀50年代，Swin和他的同事利用原代細胞體外培養試驗證明了來源于不同物種的纖維細胞均不具備無限分裂的潛能。取得突破性進展的還是Hayflflick和Moorhead，他們做了更系統更細致的觀察和描述，他們對25株人成纖維細胞進行原代培養，在這個過程中發現，經過約50次傳代之后，所有細胞出現功能退化，并且喪失分裂能力的現象。此后人們將這一現象稱之為“Hayflflick極限”或者自發性老化。之后也有事實證明，細胞老化并不是體外培養所導致，細胞在體內也會隨著年齡的增長，逐步走向老化。

※細胞老化最開始的現象通常為細胞內部會出現空泡（可能是凋亡小體），也可能會出現黑點，大多沿細胞周邊排布，內部中間也可能會顯現一些，但相對周邊較少；

※老化的細胞會出現細胞體積縮小，胞質濃縮，胞膜起泡，皺縮等現象；

※老化以后的細胞會出現立體感慢慢消失，開始成扁平狀，細胞與細胞之間的間隔減小或混在一起，細胞不再是梭形，而會成為各種不規則形狀；

※細胞折光性變差，鏡下可見細胞“變薄”，做轉染實驗時，細胞死亡率會較高，但培養液不會發生迅速變黃的現象，仍清亮。（如果是細菌污染的話，一般會出現培養液的迅速變黃，混濁，鏡下可見大量繁殖的細菌；若是支原體污染的話，細胞也會失去正常形態，會有細胞的死亡）；

※細胞的貼壁性減弱，開始有細胞漂浮在培養液中；

※老化的細胞表面分泌物會增多，細胞表面的純凈度越來越低；

※分裂的細胞數量明顯的減少，同時細胞的增殖速度也會大大下降；

細胞開始長角分化。

如何進行污染源排查？

*血清：其他試劑保持不變，僅更換血清。

*基礎培養基：其他試劑保持不變，僅更換基礎培養基。

*PBS：其他試劑保持不變，僅更換PBS。

*胰酶：若細胞復蘇的很好，一傳代就污染，可以嘗試其他試劑保持不變，更換消化用胰酶，看細胞狀態。

細胞反復復蘇都會出現污染，那可保持培養體系不變，培養其他類型且適用于此培養體系的細胞，觀察是否有污染出現。整個營養體系：基礎培養基、血清、營養添加物都可使用控制變量法進行排查。