問題一：說明書上說洗板時要把孔里的水甩干，可我做的時候，無論我怎么拍，孔底還是有殘留液體，請問這對試驗有沒有影響？或著有沒有別的什么好的辦法可以解決這個問題？

答：有一定的影響.尤其二抗反應后洗滌不好，會出現非特異.ELISA試驗中洗滌是關鍵.盡可能甩干,而且盡量少拍,不一定每次都很干,但是*后一次洗滌要盡量干.洗滌中另一個值得注意的是盡量不要出氣泡. 如果有條件的話，可用洗板機。

問題二：什么才叫封閉好了呢?有沒有什么標準?

答：一般用1%BSA，150μl，37度，2h，如果還有非特異反應的話，可能有其他原因，比如加樣時濺到了壁上或有氣泡，洗滌不充分，二抗濃度過高，封閉物不合適以及反應條件是否得當等。

問題三：1%bsa,你是用什么稀釋的,我用過pH9.6的cbs和pH7.4的pbs稀釋,結果封閉的效果都不怎么明顯,與不封閉差不多.

答：1%BSA用PBS稀釋就可以了。還有就是要注意你的操作，背景高不一定是封閉的問題。

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