組織活性氧(ROS)檢測試劑盒（DHE）

一、產品簡介：

組織活性氧檢測試劑盒是一種利用熒光探針DHE進行組織活性氧檢測的試劑盒。本試劑盒中的DHE ROS探針為紅色熒光的活性氧探針，具有510/610nm的最大激發/發射波長。DHE ROS探針在組織中活性氧存在的條件下，被氧化生成紅色熒光物質，紅色熒光強度與組織內活性氧水平成正比，檢測 DHE 產物的熒光強度就可以知道組織內活性氧的水平。 在激發波長510nm，發射波長610nm附近，使用熒光分光光度計、熒光酶標儀、等檢測DHE產物熒光，從而測定組織內活性氧水平。活性氧(Reactive oxygen species, ROS)包括過氧化氫（H2O2，Hydrogen peroxide）、羥基自由基（•OH，Hydroxyl radical）、單線態氧（1O2，Singlet oxygen）、 一氧化氮（NO，Nitric oxide）、超氧陰離子(•O2-，Superoxide anion)、過氧化自由基(ROO•，Peroxylradical)、過氧羥自由基（HOO•，hydroperoxyl）及其下游產物過氧化物過氧亞硝基陰離子
（ONOO-，Peroxynitrite anion）、ClO-和羥化物等，參與細胞生長增殖、發育分化、衰老和凋亡以及許多生理和病理過程。
 活性氧（reactive oxygen species，ROS）的產生主要是氧化磷酸化的結果，在呼吸鏈中，在某些位點會有“泄露”的電子直接和氧氣或和其他電子受體反應，在酶或非酶作用下引發 一系列反應生成不同種類的活性氧：“泄露”的電子最初和氧氣反應生成超氧陰離子自由基（O2•-）。超氧陰離子遇水生成 H2O2，同時過氧化氫也可由氧氣在單 胺氧化酶（monoamine oxidase，MAO）的作用下生成，生成的過氧化氫在髓過氧化物酶（myeloperoxidase, MPO）的催化下與 Cl-反應可生成ClO-，在鐵或銅離子的催化下發生Fenton反應生成OH•，超氧陰離子遇氮氧化物反應生成ONOO-。這些生成的高氧化活性的物質統稱為活性氧。
 適用：新鮮組織， 一般最好使用新鮮組織樣本檢測活性氧，反映的是組織當時的活性氧狀態。凍存的組織樣本的ROS在長期凍存過程中會損失掉，有條件的話就使用新鮮樣本，不建議使用凍存的組織樣本。已經凍存的組織樣本中殘余的ROS也可以用本試劑盒檢測。

二、產品組成：

三、自備材料：

1、熒光分光光度計或熒光酶標儀，離心機，移液器，冰箱，冰盒

2、PBS 緩沖液或者 HBSS

3、離心管，吸頭，一次性手套，熒光檢測專用黑色 96孔板

 組織活性氧(ROS)檢測試劑盒（DHE）

四、操作步驟(僅供參考)：

1、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體收集至管底，避免開蓋時液體灑落。

2、熒光探針標記后，一定要洗凈殘余的未進入細胞內的探針，否則會導致背景較高。

3、探針標記完畢并洗凈殘余探針后，可以進行激發波長的掃描和發射波長的掃描，以確認探針的標記情況是否正常。

4、盡量縮短探針標記后到測定所用的時間，以減少各種可能的誤差。

5、原位檢測必須使用熒光檢測專用的黑色透明底96孔細胞培養板。

6、操作步驟僅供參考，請根據實際樣本情況調整。

五、注意事項：

1、正式實驗前請選取幾個樣本做預實驗，以優化實驗條件，取得最佳實驗效果。

2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。

3、禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

4、樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結果。

5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。

6、實驗后完成后所有樣品及接觸過的器皿應按照規定程序處理。

7、避免反復凍融。

8、可以根據需要分裝后凍存。

9、探針為DMSO溶液，在 2-8℃時是固體狀態，冬季氣溫較低時為凝固狀態，極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱融解，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。

六、有效期：-20 ℃避光有效期為一年

組織活性氧(ROS)檢測試劑盒（DHE）