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C18液相色譜柱的使用注意簡述

來源:大連凱美化工工程配套有限公司   2022年08月15日 10:20  
在選用色譜柱時,應充分考慮所分析樣品的極性大小、化合物的種類數量、結構特征。根據化合物的性質,選擇合適的色譜柱和分析條件。不同類型的色譜柱使用的流動相不同,使用錯誤的流動相會降低柱效,損傷柱子。如分析極性較大的多糖類成分,應當采用親水性的反相填料。對于*次使用的色譜柱,還應按照廠家的出廠說明對色譜柱進行低流速的沖洗活化,活化后的色譜填料共價鍵鍵合力增強,柱效提高,壽命延長。
在使用液相色譜C18儀柱過程中,須注意以下事項:
1、新C18色譜柱在使用前,須先用甲醇或乙腈試劑以20倍柱體積低流速沖洗,作用是使固定相能充分潤濕、碳鏈舒展,使色譜柱的性能達到好狀態。具體操作是,將配制好65%的乙腈/水沖洗后,把色譜柱進口端連接在色譜儀上,出口端放空(不可連上檢測器,以免污染了檢測器),以0.1ml/min~0.5ml/min的低流速將色譜柱中的清稀溶液吹干,過20分鐘后再接上檢測器,以1.0ml/min的流速,繼續沖洗2~8小時;
2、液相色譜儀檢測分析樣品完畢后,須沖洗色譜柱。尤其是流動相中含有酸或鹽時,需將色譜柱中的酸或鹽沖洗干凈,通常建議用10%甲醇水沖洗20倍柱體積;
3、若色譜柱處于長期閑置狀態時,要將色譜柱沖洗,建議沖洗3-4小時以上,后保存在純有機試劑或高比例的有機試劑溶液(如90%甲醇水)中;
4、由于C18柱的固定相疏水性較強,在使用過程中盡量不要使用高水相條件,若水相比例過高易引起固定相疏水塌陷,引起柱效迅速下降,甚至造成不可逆的負面影響;由于碳載量高,表現尤為明顯,建議使用過程中水相比例不超過90%;
5、色譜柱壓力升高、柱性能下降:通常為色譜柱被污染,對色譜柱進行再生處理可恢復部分柱效;
6、色譜柱壓力驟升:通常由鹽析出或篩板堵塞引起,若是鹽析出,用10%甲醇水低流速沖?洗至壓力恢復即可;若判斷并非鹽析出,以純甲醇或10%甲醇水為流動相反沖色譜柱(將色譜柱反接,不接檢測器),若反沖半小時仍無效果則說明反沖無效,需尋找其他原因。 

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