支原體污染一直是細(xì)胞培養(yǎng)的“頭號(hào)敵人”，但是支原體的存在卻十分普遍，它的“不請(qǐng)自來(lái)”總是讓我們措手不及。世界上有近60%的實(shí)驗(yàn)室正在遭受支原體污染的困擾，今天就讓我們來(lái)好好認(rèn)識(shí)這個(gè)“刺頭”吧！

什么是支原體？

支原體結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，具有高度多形性、無(wú)細(xì)胞壁、增殖緩慢、可在人工培養(yǎng)基中存活并增殖的特點(diǎn)。除此之外，它的“個(gè)頭”很小，只有0.1-0.3um，可通過(guò)一般的濾菌器。支原體主要以二分裂方式繁殖，亦可以出芽方式繁殖，分枝形成絲狀后斷裂呈球桿狀顆粒。大部分支原體繁殖速度比細(xì)菌慢，適宜生長(zhǎng)溫度為35℃，最適pH值為7.8～8.0。在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)時(shí)，形成典型的“荷包蛋”狀菌落。

支原體是如何“欺負(fù)”細(xì)胞的？

我們知道一株被支原體污染的細(xì)胞是無(wú)法用來(lái)做實(shí)驗(yàn)得出準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的--一方面是因?yàn)橹гw本身也是一種原核細(xì)胞生物，相當(dāng)于一種交叉污染；另一方面，細(xì)胞感染支原體后，由于支原體大量消耗培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)和細(xì)胞代謝的基礎(chǔ)成分，包括核酸前體、氨基酸、維生素、脂質(zhì)、膽固醇等，導(dǎo)致細(xì)胞增殖緩慢及各種代謝、功能紊亂甚至喪失；除此之外，支原體還會(huì)吸附在細(xì)胞表面，破壞細(xì)胞膜的完整性，更有少數(shù)類型支原體可進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，如發(fā)酵支原體、生殖支原體和肺炎支原體。

如何“確診”細(xì)胞支原體污染？

支原體污染之所以讓廣大科研人員頭疼，是因?yàn)樗谄胀ü鈱W(xué)顯微鏡下難以被發(fā)現(xiàn)，并且細(xì)胞被污染早期不會(huì)表現(xiàn)出明顯的“癥狀”。

一般來(lái)說(shuō)，如果培養(yǎng)過(guò)程中細(xì)胞增殖突然變慢，培養(yǎng)基中黑點(diǎn)、碎片明顯增多，培養(yǎng)基PH變化（變黃）周期變短，那么細(xì)胞很可能已經(jīng)感染了支原體。這時(shí)候，就需要使用各種檢測(cè)手段來(lái)確認(rèn)。目前常用的方法有：DNA染色法，支原體培養(yǎng)法，PCR法（包括凝膠電泳和熒光定量），化學(xué)發(fā)光法。前兩種方法結(jié)果可靠，但實(shí)驗(yàn)周期長(zhǎng)。PCR法原理是在支原體16S rRNA基因的保守區(qū)設(shè)計(jì)引物，通過(guò)檢測(cè)支原體DNA來(lái)檢測(cè)細(xì)胞中有無(wú)支原體的污染，得到的廣泛應(yīng)用。

細(xì)胞“確診”支原體污染后，怎么辦？

如果您的細(xì)胞不幸感染了支原體，比較好處理方式是立即丟棄該細(xì)胞，并對(duì)培養(yǎng)箱、超凈臺(tái)等設(shè)施及場(chǎng)所進(jìn)行消毒滅菌。因?yàn)橹гw的傳播非常隱秘，相關(guān)研究表明其甚至能通過(guò)氣溶膠傳播。當(dāng)然，如果您的細(xì)胞非常珍貴或者不能再獲得，可以嘗試使用抑制支原體的藥物進(jìn)行處理，嘗試消除支原體污染。能抑制支原體的藥物有四環(huán)素；大環(huán)內(nèi)酯類藥物，如羅紅霉素、克拉霉素、阿奇霉素等；喹諾酮類藥物，如氧氟沙星、司帕沙星等。

這個(gè)過(guò)程一般周期較長(zhǎng)，因?yàn)槭褂盟幬锾幚頃r(shí)需配合多次大比例連續(xù)傳代來(lái)提高成功率。堅(jiān)持，就是勝利！

千舍生物熱賣細(xì)胞：

人食道癌細(xì)胞 kyse30

人食管鱗癌細(xì)胞 kyse150

人食道鱗狀細(xì)胞癌 KYSE-410

人肝癌細(xì)胞 Li-7

人膠質(zhì)瘤細(xì)胞 LN229

人前列腺癌細(xì)胞 LNCaP clone FGC

人結(jié)直腸癌細(xì)胞 lovo

人結(jié)直腸癌細(xì)胞氟尿嘧啶耐藥株 LOVO/5FU

人結(jié)直腸癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 LOVO+LUC

人結(jié)腸腺癌細(xì)胞 LS1034

人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞 LS174T

人結(jié)直腸癌細(xì)胞 LS180

人結(jié)直腸癌細(xì)胞 LS513

人肝星形細(xì)胞 LX-2

人肝星形細(xì)胞+GFP LX-2+GFP

人肝癌細(xì)胞 Mahlavu

人乳腺上皮細(xì)胞 MCF-10A

人乳腺癌細(xì)胞 MCF-7

人乳腺癌阿霉素耐藥細(xì)胞 MCF-7/Adr

人乳腺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 MCF-7+luc

人乳腺細(xì)胞 MDA-KB2

人乳腺癌細(xì)胞 MDA-MB-157

人乳腺癌細(xì)胞 MDA-MB-231

人乳腺癌X細(xì)胞+GFP MDA-MB-231+GFP

人乳腺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 MDA-MB-231+LUC

人乳腺癌細(xì)胞 MDA-MB-361

人乳腺癌細(xì)胞 MDA-MB-415

人黑素瘤細(xì)胞 MDA-MB-435S

人乳腺癌細(xì)胞 MDA-MB-436

人乳腺癌細(xì)胞 MDA-MB-453

人乳腺癌細(xì)胞 MDA-MB-468

人子宮頸表皮癌細(xì)胞 ME-180

人成巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞 MEG-01

人膜間皮細(xì)胞 MET-5A

人骨肉瘤細(xì)胞 MG63

人胃癌細(xì)胞 MGC-803

人高轉(zhuǎn)移性肝癌細(xì)胞 MHCC-97H

人高轉(zhuǎn)移性肝癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 MHCC-97H+luc

人高轉(zhuǎn)移性肝癌細(xì)胞 MHCC-97L

人胰腺癌細(xì)胞 MIA-PACA-2

人胃癌細(xì)胞 MKN-45

人胃癌細(xì)胞 MKN-74

人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞 MM.1R

人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞 MM.1S

人急性淋巴母細(xì)胞白血病細(xì)胞 MOLT-4

人急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞 MonoMac6

人胚肺成纖維細(xì)胞 MRC-5（有限細(xì)胞系）

人子宮頸表皮癌細(xì)胞 MS751

人急性淋巴母細(xì)胞白血病細(xì)胞 MT-4

人侵襲性脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞 MUM2B

人前B急性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞 NALM-6

急性早幼粒細(xì)胞株 NB 4

人畸胎癌細(xì)胞 NCCIT

人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 NCI-H1299

人肺腺癌細(xì)胞 NCI-H1395

人肺癌細(xì)胞 NCI-H1437

人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞 NCI-H157

人肺支氣管癌細(xì)胞 NCI-H1650[H1650]（MKN-1）