C18色譜柱因鍵合方式的不同、粒徑的不同、長度的不同，內(nèi)徑的差異等多方面因素，呈現(xiàn)出不同選擇性。這樣，在市場上就出現(xiàn)了數(shù)百種具有不同分離選擇特性的C18色譜柱。

對于傳統(tǒng)的C18色譜柱，pH值使用范圍通常為2～7，因?yàn)閜H值高于8時(shí)C18固定相會受到限制。由于殘余硅羥基的存在，易對堿性化合物造成不可逆吸附，造成峰拖尾，影響分離與分析。pH值太低則會使鍵合的烷基脫落，而且對成分的分離達(dá)不到要求。

1、酸性條件下C18的選擇

為了改善C18色譜柱在低pH值時(shí)的穩(wěn)定性，有人提出了空間位阻方法。

空間位阻作用是指連接較大基團(tuán)，立體阻礙溶質(zhì)基團(tuán)進(jìn)攻硅醇基，使硅氧烷能夠再生，提高了化學(xué)鍵合固定相抗水解的能力。

還有人制備了側(cè)鏈中含有異丙基或異丁基的C18化學(xué)鍵合固定相。該固定相由于引入了較大的側(cè)鏈基團(tuán)，立體阻礙了殘留硅醇基與溶質(zhì)之間的相互作用，在低pH值條件下能夠保持穩(wěn)定，這種化學(xué)鍵合固定相更適合酸性物質(zhì)的分離。

Zorbax Stable Bond C18色譜柱就使用了空間位阻技術(shù)，其使用單官能團(tuán)硅烷，具有較大的二異丁基(SB-C18)側(cè)鏈基團(tuán)，空間位阻關(guān)鍵的硅氧烷鍵合到硅膠表面，以避免在低pH值條件下水解破壞，在酸性流動相條件下提供良好的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性。因此，Stable Bond色譜柱成為低pH值方法開發(fā)的很好的選擇。在方法開發(fā)初期，若選定流動相為酸性，可將此類色譜柱作為很好的選擇。

2、堿性條件下C18的選擇

制造快速分離堿性化合物的化學(xué)鍵合相一直是研究熱點(diǎn)。

雙齒鍵合固定相的每個硅烷化分子中含有兩個硅原子，兩個硅原子之間以-O-或-CH2-CH2等基團(tuán)連接，每個硅原子含有1個C18官能團(tuán)。它的環(huán)狀結(jié)構(gòu)無論在低pH值條件下，還是高pH值條件下均顯示了較高的穩(wěn)定性和滿意的柱效。

與傳統(tǒng)的單齒化學(xué)鍵合相相比，這種化學(xué)鍵合固定相突出的優(yōu)點(diǎn)是在低、中、高pH值時(shí)都有很好的穩(wěn)定性。使用C18雙齒化學(xué)鍵合固定相的商品柱有Zorbax Extend-C18色譜柱，其耐受pH值達(dá)11.5，特別適合在高pH值的流動相條件下對強(qiáng)堿性化合物進(jìn)行有效的色譜分離。