為了最大限度地延長高效液相色譜柱的使用壽命并確保其最佳性能，有必要對色譜柱進行適當的維護。許多不同因素可能導致色譜柱分離度和靈敏度降低，但通常情況下，下列因素會導致絕大多數色譜柱出現性能問題。
1、污染物
通常，樣品中含有來源于樣品基質的成分，這些成分可能會吸附于色譜柱之上。鹽、脂類、增塑劑和聚合物是在分析過程中可能與固定相接觸的成分。這些成分會損壞色譜柱和檢測器，并在分析過程中出現雜質峰。如果這些雜質成分不能被流動相洗脫，它們就會吸附在色譜柱上。隨著時間的推移，分析物會與這些雜質產生相互作用，導致保留時間改變以及峰拖尾，從而影響分離。此外，這些雜質的積累可能會造成色譜柱堵塞，導致色譜柱壓力升高、泵損壞、并導致色譜柱柱床塌陷，強烈建議使用保護柱來避免這類問題。保護柱是用與分析柱相同的填料填充的短柱，安裝在進樣器和分析柱之間。使用一段時間后，需要更換一個新的保護柱，以最大限度地延長分析柱的使用壽命。2、pH不穩定
始終確保色譜柱在pH耐受范圍內使用。請查閱色譜柱的使用說明書以確認該柱的pH范圍。當保存色譜柱時，應將色譜柱中的酸性或堿性緩沖鹽清洗干凈。3、高背壓
面多孔顆粒(SPP)的固定相與粒徑更小的全孔顆粒(FPP)相比，能在更低的背壓下提供更高的分離。藥物非臨床研究質量管理規范的要求是在盡可能低的壓力下運行分析方法，以最大限度的延長儀器和色譜柱的使用壽命。避免壓力沖擊也是很重要的。壓力沖擊是指壓力在短時間內突然增加或減少。他們可能導致色譜柱柱床塌陷，并導致色譜圖峰分叉。所有2µm產品和1000? 2.7µm內徑為2.1mm和3.0mm色譜柱耐壓1000bar。其余規格的色譜柱耐壓600bar。如下表所示：
顆粒大小
| 內徑(mm) | 耐壓(bar)
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| 所有 | 0.75和0.1 | 600
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| 所有 | 0.2 – 0.5 | 400
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| 顆粒大小 | 內徑(mm) | 耐壓(bar) |
| 所有 | 1.0 | 600
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2μm
| 2.1, 3.0 | 1000
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| 2.7µm 1000? (孔徑) | 2.1, 3.0 | 1000
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| 2.7µm | 2.1, 3.0, 4.6 | 600
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| 3.4 µm 400? (孔徑) | 2.1, 3.0, 4.6 | 600
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5μm
| 2.1, 3.0, 4.6 | 600
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注：“所有”表示所有可用的色譜柱規格型號
4、流動相質量差
必須使用高質量的溶劑(HPLC或MS級)作為流動相，并確保流動相的pH值在所使用的色譜柱的耐受pH范圍內。請查閱色譜柱使用與維護指南。質量差的溶劑中往往會含有雜質，會吸附在色譜柱上，從而干擾分離。建議在使用前對流動相進行過濾，在分析過程中使用保護柱有助于除去流動相中的顆粒雜質。
5、柱溫過高
為了最大限度的延長色譜柱的使用壽命，柱溫不宜超過色譜柱的最高可耐受溫度。可耐受溫度可以查閱色譜柱使用與維護指南。6、平衡時間不足
色譜柱的平衡時間取決于色譜柱規格。一般情況下，一根色譜柱可用20倍柱體積的溶劑平衡。請參照以下方程計算柱體積：①色譜柱體積(µL)= (1/4)(內徑×2)(π)(柱長)(孔隙體積)1/4×4.41×3.14×100×0.50 =173µL =0.17mL當流速為0.4mL/min時，可以在8.5分鐘內達到20倍柱體積。
關于色譜柱堵塞、污染和清洗的提示
1、壓力突然增加——所有鍵合相
一個高的壓力峰值或者明顯的急劇增加的柱壓，通常表明色譜柱被堵塞。為了清除堵塞物，可以嘗試反接色譜柱，不接檢測器，清洗20倍柱體積以去除色譜柱篩板上的顆粒或者污染物。——請注意：不建議反沖毛細柱或2µm HALO色譜柱。2、色譜柱清洗與再生
吸附累積的雜質對色譜柱是有損壞的，但在某些情況下，這些雜質可以被除去。下面將介紹如何能實現這一點。①所有非毛細柱和粒徑>2µm的色譜柱清洗（每項溶劑沖洗10倍柱體積）
C18, AQ-C18, C8, C4, C30, ES-CN, Phenyl-Hexyl, PFP, RP-Amide, Biphenyl和Diphenyl鍵合相為了從色譜柱上去除強殘留的物質，使用非常強的溶劑(如正在使用的流動相的100%的有機成分)反向清洗色譜柱。如果需要使用更強的溶劑清洗，建議使用二氯甲烷和甲醇的混合溶劑(95/5 v/v)。特殊情況下可能需要使用非常強的溶劑，如DMF或者DMSO。——請注意：不建議反沖毛細柱或2µm HALO色譜柱。
②所有顆粒的色譜柱再生（每項溶劑沖洗20倍柱體積）C18, AQ-C18, C8, C4, C30, ES-CN, Phenyl-Hexyl, PFP, RP-Amide, Biphenyl和Diphenyl鍵合相
如果前述的清洗程序無效，可以嘗試使用其他方法再生色譜柱。下面是反相色譜柱(RP)的再生程序。一般來說，再生的過程是相似的，其共同點是使用的清洗溶劑強度增加，并通常以非極性溶劑結束。至關重要的是，所使用的溶劑必須是能夠互溶的。步驟1-4通常足以清洗大多數的色譜柱，但是如果這還不夠，可以增加5和6。但是，在使用強非極性溶劑(如己烷)后，在重新平衡到初始溶劑體系之前用IPA清洗過渡是至關重要的，因為水與己烷不互溶。
HILIC和PENTA-HILIC鍵合相
1、HILIC色譜柱清洗
——請注意：不建議反沖毛細柱或2µm HALO色譜柱為了從色譜柱上去除強保留的物質，使用50/50甲醇/水等強溶劑反相清洗色譜柱。特殊情況下，可能需要使用非常強的溶劑，如100%的流動相中的極性成分。另外，二氯甲烷和甲醇的混合溶劑(95/5 v/v)通常非常有效。對于清洗后的HILIC色譜柱，需要先以70/30 ACN/H2O低流速沖洗2 – 3小時。
2、Penta-HILIC色譜柱清洗
為了從色譜柱上去除強保留的物質，使用10/90甲醇/水等強溶劑反向清洗色譜柱。特殊情況下，可能需要使用非常強的溶劑，如100%的流動相中的極性成分，通常是水。
色譜柱保存(所有鍵合相)
1、長期保存
長時間保存(超過5天)硅膠基質的色譜柱，建議使用100%乙腈。例外的是Biphenyl，它應該保存在100%甲醇中。使用含鹽流動相后，一定要用等比例不含鹽的流動相沖洗色譜柱除鹽，然后再用至少10倍柱體積的乙腈沖洗保存。
2、短期保存
短時間保存(低于5天)硅膠基質的色譜柱，可將色譜柱保存在大部分常規使用的流動相中。使用含鹽流動相后，一定要用等比例不含鹽的流動相沖洗色譜柱除鹽，然后再保存。注意：每根色譜柱在使用之前，請仔細閱讀使用說明書！
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