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手把手教會(huì)您如何正確校正紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)！
對(duì)于紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)而言在使用前必須要做基線校正，對(duì)于此項(xiàng)工作的原理和操作方法許多使用者的認(rèn)識(shí)不盡相同；為此談?wù)勎覀兊恼J(rèn)識(shí)。
1、為何要做基線校正？
大家都知道，紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)的光學(xué)系統(tǒng)基本是由光源、單色器、檢測(cè)器等三部分組成的。在我們使用的波長(zhǎng)區(qū)域中，上述部件在不同的波長(zhǎng)下的響應(yīng)值均不相同；通俗地說(shuō)、即使沒(méi)有樣品，儀器如果不做基線校正，那么在190nm至1100nm的范圍中，吸光值或透過(guò)率不會(huì)是一條直線，這是一種客觀的物理現(xiàn)象。
2、被校正的基線種類和用途：
①系統(tǒng)基線：
所謂系統(tǒng)基線就是儀器固有的波長(zhǎng)范圍的總基線；例如一臺(tái)紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)出廠設(shè)計(jì)的波長(zhǎng)全程范圍是190nm至1100nm，那么它的系統(tǒng)基線就是這個(gè)范圍。一般來(lái)講，作為分析人員對(duì)一臺(tái)儀器做全程掃描測(cè)試是比較少見(jiàn)的；之所以要做系統(tǒng)基線的目的一般是將儀器的光學(xué)系統(tǒng)的響應(yīng)值校正到基本一致；這就類似馬拉松賽跑一樣，只要大家在同一起跑處比賽，前后差幾米出發(fā)無(wú)所謂。
②用戶基線：
所謂用戶基線就是分析者自己設(shè)定的測(cè)量波長(zhǎng)區(qū)域的一段基線；由于這是分析所需要的區(qū)域，為了保證測(cè)試的準(zhǔn)確性，故用戶基線的校正是非常重要和必要的；這就類似百米賽跑一樣，運(yùn)動(dòng)員要在同一個(gè)起跑線上比賽而不能搶跑，否則無(wú)法準(zhǔn)確計(jì)算成績(jī)。
3、基線校正的方法
①系統(tǒng)基線：
系統(tǒng)基線的校正較為簡(jiǎn)單，一般情況下樣品室內(nèi)不放樣品，僅做光學(xué)系統(tǒng)的校正；如果一定要使用全波段的測(cè)量那另當(dāng)別論。同時(shí)需要注意的是：系統(tǒng)基線無(wú)需經(jīng) 常校正，一般半個(gè)月或一個(gè)月校正校正一次即可。對(duì)有的儀器來(lái)說(shuō)，系統(tǒng)基線校正過(guò)于頻繁反而會(huì)造成基線漂移嚴(yán)重。
②用戶基線校正方法：
兩只比色杯盛有空白溶液分別放置在樣品及參比光路中，校正波長(zhǎng)范圍要大于分析波長(zhǎng)范圍；例如、分析設(shè)定范圍為220nm-500nm，那么校正波長(zhǎng)就要設(shè)定為210nm-510nm；等待校正結(jié)束后再將波長(zhǎng)設(shè)定回到原來(lái)的220nm-500nm范圍。
4、基線校正的注意事項(xiàng)：
①基線校正時(shí)要保證紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)有一定的預(yù)熱時(shí)間；
②每更換一種參比溶液后均要重新做基線校正；
③如果參比溶液的吸光度大于樣品的吸光度值時(shí)測(cè)試結(jié)果會(huì)出現(xiàn)負(fù)值，此時(shí)要考慮使用何種溶液做基線校正了。
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