美國(guó)cellscript試劑盒包括用于體外轉(zhuǎn)錄的試劑盒以及使用帽類似物或加帽酶的5' RNA加帽的試劑盒。

l mRNA為什么要加帽：

1、防止5'末端被降解。

2、在細(xì)胞中，幫助成熟mRNA穿過核膜，進(jìn)入胞質(zhì)。

3、增強(qiáng)翻譯。

4、幫助后續(xù)可變剪接的過程。

l 加帽類型：

1、Cap 0型（m7G5ppp5Np）：僅所加的鳥嘌呤核苷酸被甲基化，存在于單細(xì)胞。

2、Cap I型（m7G5ppp5NmpNp）：轉(zhuǎn)錄本第一個(gè)核苷酸的2'-O位也被甲基化，普遍存在于所有細(xì)胞。

3、Cap II型（m7G5ppp5NmpNmpNp）：轉(zhuǎn)錄本第一和第二位的2'-O位都甲基化，存在于10％-15％細(xì)胞中。

l 體外加帽的必要條件：

1、在基因組全長(zhǎng)克隆時(shí)，必須在正向引物5'末端添加T7強(qiáng)啟動(dòng)子序列。

2、以T7啟動(dòng)子作為體外轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子。

3、在正向引物5'末端加一個(gè)“蓋帽G”，有利于提高體外轉(zhuǎn)錄得到的RNA分子的侵染活性。

美國(guó)cellscript試劑盒有：

l 美國(guó)cellscript試劑盒(C-SCCS1710)特點(diǎn)：

1. ScriptCap™ Cap 1 Capping System提供ScriptCap Capping Enzyme和ScriptCap 2'-O-Methyltransferase（2'氧甲基轉(zhuǎn)移酶），可在RNA的5'末端產(chǎn)生Cap 0或Cap I帽結(jié)構(gòu)，也可單獨(dú)獲得Cap 0或Cap I。

2. 反應(yīng)后的Cap RNA可直接進(jìn)行Poly(A)聚合反應(yīng)，無需再次進(jìn)行處理，可方便進(jìn)行后續(xù)的翻譯過程。

3. ScriptCap Cap I Capping System改進(jìn)了共轉(zhuǎn)錄加帽方法，使其加帽效率可以接近100%，所有加帽RNA均能夠大量且正確產(chǎn)生，最終可以以合理的成本獲得大量且正確的加帽RNA 。

l 美國(guó)cellscript試劑盒(C-SCCS1710)應(yīng)用：

      該產(chǎn)品多用于用于動(dòng)物體外RNA轉(zhuǎn)錄合成過程，以進(jìn)行5'末端的Cap 0或Cap 1結(jié)構(gòu)的產(chǎn)生，提高體外RNA的穩(wěn)定性和翻譯效率。