TR-FRET Bridge-It® L-蛋氨酸 (L-Met) 熒光檢測試劑盒，384 孔格式

應(yīng)用：

• 直接測量樣品中的 L-Met 水平

• 使用 Met 作為底物或 Met 作為產(chǎn)物的酶（即蛋氨酸氨基肽酶）的測定

特征：

• 簡單： 將測試樣品或標(biāo)準(zhǔn)品與檢測溶液混合并孵育。絕對(duì)沒有洗滌步驟！
  

• 快速： 孵育 50 分鐘后讀取熒光信號(hào)
  

• 敏感: 檢測 L-蛋氨酸的檢測下限為 10 µM
  

• 靈活： 檢測有 FRET 和 TR-FRET 格式，可根據(jù)要求調(diào)整為比色格式。

• 特異性：與標(biāo)準(zhǔn)氨基酸或 L-Met 衍生物（L-Met 亞砜和 L-Met 砜）無交叉反應(yīng)。

L-蛋氨酸和 TR-FRET Bridge-It® 熒光檢測的背景信息

L-蛋氨酸 (L-Met)
L-蛋氨酸是一種必需氨基酸，必須從食物來源或膳食補(bǔ)充劑中獲取。它是其他硫化合物的前體，包括半胱氨酸、牛磺酸和谷胱甘肽。蛋氨酸與三磷酸腺苷反應(yīng)形成 S-腺苷蛋氨酸 (SAM)，它是體內(nèi)主要的甲基供體，有助于合成許多重要物質(zhì)，包括腎上腺素和膽堿。L-蛋氨酸也是動(dòng)物飼料的重要補(bǔ)充劑。目前，L-蛋氨酸使用高壓液相色譜 (HPLC) 方法進(jìn)行定量。HPLC 耗時(shí)、昂貴，并且由于需要大量的有機(jī)溶劑，因此對(duì)環(huán)境不友好。

TR-FRET Bridge-It® L-蛋氨酸熒光 (L-Met) 檢測1,2

真核細(xì)胞含有大約 3,000 個(gè)序列特異性 DNA 結(jié)合蛋白。這些重要的蛋白質(zhì)在有或沒有特定的小分子共調(diào)節(jié)因子（配體）的情況下起作用，控制基因組 DNA 活性的所有方面，包括基因表達(dá)、DNA 復(fù)制和 DNA 修復(fù)。Mediomics 正在應(yīng)用其新型熒光檢測平臺(tái)開發(fā)體外檢測，用于快速、靈敏地量化 DNA 結(jié)合蛋白及其小分子配體的活性。

所有序列特異性 DNA 結(jié)合蛋白的共同特性是它們能夠以高親和力和特異性結(jié)合含有核苷酸序列的 DNA 雙鏈體，即蛋白質(zhì)的 DNA 結(jié)合位點(diǎn)。

Mediomics 的新型檢測平臺(tái)依賴于這一共同特征。包含給定目標(biāo) DNA 結(jié)合蛋白的序列特異性 DNA 結(jié)合位點(diǎn)的 DNA 雙鏈體被分成兩個(gè) DNA“半位點(diǎn)”雙鏈體，每個(gè)雙鏈體都有一個(gè)短的單鏈突出端。這些單鏈延伸足夠短，因此在沒有靶蛋白的情況下幾乎不會(huì)發(fā)生自發(fā)的重新結(jié)合。然而，當(dāng)靶蛋白存在時(shí)，它對(duì)全長 DNA 序列的高親和力將驅(qū)動(dòng)兩個(gè)半位點(diǎn) DNA 雙鏈體的重新結(jié)合。這種重新結(jié)合可以通過將兩個(gè)熒光團(tuán)系統(tǒng) [一個(gè)供體 (Eu3+) 和一個(gè)受體] 并入兩個(gè) DNA 半位點(diǎn)中的每一個(gè)中來靈敏地檢測到。在該測定中，DNA 結(jié)合蛋白充當(dāng)其特定配體 (SAM) 的生物傳感器。配體與 DNA 結(jié)合蛋白結(jié)合，通過構(gòu)象變化激活結(jié)合位點(diǎn)。由于兩個(gè)熒光團(tuán)之間的時(shí)間分辨熒光共振能量轉(zhuǎn)移 (TR-FRET)，激活的 DNA 結(jié)合蛋白的存在被檢測為受體熒光團(tuán)的熒光信號(hào)增加或供體熒光團(tuán)的熒光信號(hào)減少.

Bridge-It® L-蛋氨酸熒光檢測方法具有非常理想的性能特征，包括高信背景 (S/B) 比、良好的線性動(dòng)態(tài)范圍和約 10 μM 的檢測限。總測定時(shí)間為 50 分鐘。

注： 此標(biāo)準(zhǔn)曲線僅供參考。請(qǐng)生成您自己的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

與 HPLC 程序相比，Bridge-It® L-蛋氨酸熒光檢測方法采用 384 和 96 孔微孔板形式。因此，它非常適合快速、同時(shí)測量大量測試樣品中的 L-蛋氨酸水平。此外，這種方法很容易適應(yīng)目前用于藥物發(fā)現(xiàn)研究的高通量篩選平臺(tái)。